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    人柠檬酸水解酶(ACL)酶联免疫分析ELISA试剂盒样本处理及要求

    上海一研生物科技有限公司2019年7月2日 2:11 点击:57

    人柠檬酸水解酶(ACL)酶联免疫分析ELISA试剂盒样本处理及要求:

    1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

    2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

    3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

    4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份?#20445;?#29992;无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份?#20445;?#29992;PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

    5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入?#27426;?#37327;的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入?#27426;?#37327;的PBS(PH7.4),?#27308;?#24037;或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

    6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,?#23665;?#26631;本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

    7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步骤

    ?标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各?#20934;?#26679;量都为50μl,浓度分别为90 pg/mL,60 pg/mL ,30 pg/mL,15 pg/mL,7.5 pg/mL)。

    ?加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混?#21462;?/p>

    ?温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    ?配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

    ?洗涤?#30418;?#24515;?#19994;?#23553;板膜,弃去液体,甩干,每?#20934;?#28385;洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

    ?加酶:每?#20934;?#20837;酶标试剂50μl,空白孔除外。

    ?温育:操作同3。

    ?洗涤:操作同5。

    ?显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 

    ?终止:每?#20934;?#32456;止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    ?测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


    (来源: 上海一研生物科技有限公司


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