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    RPA被誉为DNA诊断领域的革命性创新

    默瑞(上海)生物科技有限公司2018年2月28日 9:11 点击:526

     英国TwistDx公司(前身为ASM科技有限公司)成立于1999年,基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增,开发的重组酶聚合酶扩增专利技术(RPA),被誉为DNA诊断领域的革命性创新。

      What is RPA?

      概念:重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。

      RPA技术原理:

      重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

      Who uses RPA?

      ?#28304;?#20026;基础的TwistAmp? 核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测该技术对硬件设备的要求很低,特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。

      

     

      产品名称货号规格储存检测方法

      TwistAmp BasicTABAS03KIT96次-20℃终点检测:如凝胶电泳

      

     

      产品名称货号规格储存检测方法

      TwistAmp exoTAEXO02KIT96次-20℃实时荧光定量检测

      

     

      产品名称货号规格储存检测方法

      TwistAmp nfoTANFO02KIT96次-20℃测流层析试纸检测

      RPA技术?#24515;?#20123;特性:

      RPA的特性:快速检测 15min进行单分子检测试验, 简易包装 稳定冻干形式试剂. 无需热循环过程 摆脱任何仪器束缚. 便携 设备要求低,贫瘠条件亦能 完成检测

      RPA能实现多重化吗

      可以。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。不过,多重化的引物组合需要精心设计,?#21592;?#27599;个引物都能同样?#34892;?#30340;工作。需要注意的是,RPA反应的引物总量(nmol)最好不要超标太多。如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物,就应该控制不同引物的量。另外,我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、设备以及荧光团的兼容性。

      能否对模板进行定量

      可以。扩增子达到可检出水平的时间,依赖于反应起始时的模板量。初始模板的拷贝越多,扩增子就越快达到可检出水平。不过,这种定量需要精心的实验安排,确保对照反应是同时开始的。举例来说,可以利用镁离子的添加时间进行控制。因为镁离子一旦进入体系,RPA反应就会开始。

      此外,?#19979;?#30340;扩增过程有助于更精确的定量。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。

      能否进行荧光终点分析

      可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光,荧光增强意味着发生了扩增。

      能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸

      支持。在RPA反应中,连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差?#27426;唷?#25454;悉还没有发现任何差异。

      跑胶前需要回收RPA产物吗

      需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳,如果不进行产物回收,跑出来的带会出现拖尾。

      恒温扩增技术

      取代PCR的核酸扩增术 ,

      领域:广泛应用于临床诊断,食品安全检测,动物疾病检测等领域

      特点:快速,高效,特异,无需专门设备

      LAMPRPA

      开发公司日本荣研生物英国TwistDx——

      酶组分链置换DNA聚合酶重组酶;单链结合蛋白;链置换DNA聚合酶——

      最适反应温度60-65℃37-40℃Win!

      反应时间40min左右15min左右Win!

      引物数2对1对Win!

      状态液体冻干Win!

      检测方式目视;比浊检测电泳;测流试纸;探针法荧光定量——

      可否用于下游应用否否——

      仪器水浴锅或恒温箱无需任何仪器Win!

      国产化,价格低价格相对较高——

      硬性缺点气溶?#28023;?#20551;阳性终端检测相对复杂,价格高——

      新一代RPA恒温扩增荧光检测仪T8特点:小巧的的,强效的,精准的

      红隼具有紫外的?#27891;酰?#23427;们在25m的高空可以看在猎物的尿迹。

      T8 等温仪介绍:

      1、小巧便携

      2、强效的FAM?和ROX?通道作为标准

      3、精?#38750;?#23454;时的屏幕输出

      4、自动磁力混匀

      5、无需电脑

      详情请见:http://www.twistdx.com.cn/products/yqhc/64.html

      可选配件(需另购)?#21644;?#37096;电源(http://www.twistdx.com.cn/products/yqhc/65.html),&#25163;&#25552;&#31665;(http://www.twistdx.com.cn/products/yqhc/66.html)

      

     

      RPA核酸检测系列之RPA最新应用

      更多RPA相关应用请见:

      http://www.twistdx.com.cn/

      产品详情:

      


    (来源: 默瑞(上海)生物科技有限公司


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