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    外泌体微泡非特异性标志物总结分析

    伯齐科技有限公司2018年5月28日 11:36 点击:429


    外泌体微泡作为细胞间信号传导的重要媒介,越来越多的研究揭示其作为重大疾病生物标志物的临床价值。当前外泌体微泡快速,高通量,多参数的主流分析方法仍为流式分析法。流式分析法主要依赖散射光或者荧光设定分析阈值,划门分析。?#27426;?#30001;于外泌体微泡体积远小于细胞,散射光信号弱,传统流式散射光检测灵敏度低,需借助荧光标记才可分析外泌体微泡。其中,非特异荧光标记为外泌体微泡总量分析较为普遍的方法。


    近日de Rond?#28909;?#31995;统研究适合外泌体微泡非特异标记的理想标志物,详细分析Calcein AM,  Calcein violet,  CFSE,  Di-8-ANEPPS和Lactadherin(另外,因Annexin V和Lactadherin同样结合膜磷脂成分,并且依赖于钙离子,无法适用于血液等样?#20998;?#25509;标记,膜磷脂结合效率远低于Lactadherin,故不在此研究范围内)等不同类型标记物。因不同标志物标记外泌体微泡效率明显不同,并且对蛋白?#31034;?#38598;体,脂蛋白,细胞碎片等物质的干扰敏感性不同,其效能比较分析需要非常?#32454;?#30340;?#21592;?#20449;息方有意义。de Rond?#28909;?#39318;次借用Apogee纳米流式超高的散射光灵敏度和分辨率,作为不同标志物标记效能分析的参考标准,结合MCF7细胞上清和血小板外泌体微泡样本,详细比较了上述5种标志物识别外泌体微泡的效能情况。


    研究统计发现,Di-8-ANEPPS, Lactadherin?#32479;?#28789;敏散射光可以检测到100% 的EpCAM+ MCF7 外泌体微泡(图1);Lactadherin?#32479;?#28789;敏散射光可分别检测到33%和d 61% 的血小板 CD61+外泌体微泡(图2)。只?#24615;?#34880;小板蛋白质杂志去除后,Di-8-ANEPPS才可以特异识别结合外泌体微泡。Calcein AM,  Calcein violet和 CFSE则是检测灵敏度相?#36234;?#24046;或极易引起集群检测问题的标志物。因此,截止目前还没?#24515;?#22815;同时满足:标记所有外泌体微泡,特异性足够高,与抗体标记兼容,适用生物体液样本直接标记,标记检测时间低于8小时等条件的非特异标志物。 ?#27426;?#35813;研究也反映出针对不同外泌体微泡样品,选择合适的荧光标志物,结合Apogee纳米流式超灵敏散射光,仍会是当前外泌体微泡流式分析的最佳选择,快速,精准,可靠。 


    图1,EpCAM+ MCF7 外泌体微泡散射光和荧光标志物流式分析


    图2,血小板外泌体微泡散射光和荧光标志物流式分析



    Apogee超灵敏纳米流式细胞仪是英国Apogee Flow厂家研发,它独有的专利光学设计使其可检测最小70nm颗粒,10nm分辨率。英国Apogee Flow技术早前广泛为美国军方用于战场上快速微生物检测。继之前?#26412;?#20013;科院微生物所和?#26412;?#35745;量研究所引入了Apogee流式细胞仪为微生物做快速检测和定量,上海第二军医大学转化医学?#34892;?#20063;成功安装了超灵敏Apogee A50-Micro Plus型号来进行外泌体微泡的研究。此外,每年在国际胞外囊泡大会上,更有不少科学家展示的研究成果均采用Apogee超灵敏纳米流式细胞仪来进行胞外囊泡研究。2015年?#20998;?#22269;家计量研究协会评定英国Apogee超灵敏纳米流式细胞仪为在微泡(<100nm)检测中最灵敏的系统。


    参考文献



    de Rond, Leonie, et al. "Comparison of Generic Fluorescent Markers for Detection of Extracellular Vesicles by Flow Cytometry." Clinical chemistry 64.4 (2018): 680-689.


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