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    电转染过程中易出现的问题

    ?#26412;?#33521;格恩生物科?#21152;?#38480;公司2018年2月23日 16:18 点击:397

    1.       不合适的电场强度

    合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。

    2.  细胞选择错误

    用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定期的细胞差,电转后,细胞膜的恢复能力强,而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA.

    3.  质粒质量不佳

    应选择纯度高的质粒,首先DNA/RNA应该超纯(A260/A280>1.8),其次应不含内毒 素,同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。另外,DNA浓度不宜过高。

    4.  电转染试剂不合适

    电击会对细胞造成?#27426;?#31243;度的伤害,在转染试剂的选择上要注意,应选择具有细胞膜修复成分的电转染试?#31890;?#22914;engreen的Entranster-E,?#23665;?#30005;击对细胞的损伤降到最低。并且,Entranster-E可适用于lonza、Bio-rad、BTX等多种电转仪。

     

     


    (来源: ?#26412;?#33521;格恩生物科?#21152;?#38480;公司


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