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    组织培养的基本条件

    上海喆图科学仪器有限公司2019年7月9日 2:10 点击:60

    1?无菌及灭菌 
    由于要维持细胞在体外长时间生长、繁殖,所以在培养过程中的全部用具及操作过程必须保证无菌,一旦有细菌污染细胞则不能继续存活。因此所用器具应首先进行?#32454;?#28165;洗,然后再进行高压灭菌或干烤灭菌。对不能用高压或干烤灭菌的液体可用除菌滤器除菌。过去的操作环境一般在无菌室(密封,使用前用紫外线?#26412;?进行。近年多应用国产洁净工作台(借助空气过滤及高速吹风除
    菌)进行操作。亦可二者结合应用。 
    2?培养基(medium) 
    人工培养基的成分主要含有各种氨基酸,维生素,糖和无机盐等,并使其有与体液相等的渗透压,同时加入适量的碳酸氢钠,以调节其酸碱度,使pH维持在7.2—7.6左右。目前常用的人工培养基种类很多,如:“199”、“RPMI1640”、伊格(Eagle)、费歇(Fischer)等等。它们之间的区别主要在含有氨基酸、维生素等的数量和种类上有所不同。在应用时可根据所培养的细胞类型及自己的经验而选择。但是,目前无论使用哪种培养基一般都要加入5—20%的动物血清,Z常用者为初生的小牛血清,其次,马血清、人血清等亦有应用。由于对血清的成分还不完全清楚,所以它对培养细胞的作用机理?#19981;?#19981;十分了解。近来对无血清培养亦有文献报道,但这一问题尚在研究之中。当然,理想的人工培养基Z好完全模拟体内环境,不过目前尚未达到。 
    3?培养瓶和培养皿 
    液体培养常用长方形培养瓶,有100ml,30ml,?15ml不等,此外还有扁圆形的卡氏瓶以及适用于微量培养的多孔微量培养板等。在二氧化碳培养箱中进行开放培养时多用培养皿,同时它也被用于半固体培养。国内所用培养瓶(皿)均采用优?#25163;行圆?#29827;制成,便于洗?#30899;?#21453;复应用。但国外现已普遍采用塑料制品。 
    4?温度及二氧化碳 
    用培养瓶进行培养,一般放于37℃恒温箱中即可,目前国外已普遍将细胞接种于培养皿内,在含5—10%的二氧化碳的空气环?#25345;?#36827;行培养。一定量的二氧化碳有利于酸碱度的维持及细胞生长。二氧化碳培养需要放在二氧化碳培养箱中。二氧化碳培养箱,它除可维持37℃恒温之外,还可维持一定的二氧化碳浓度,虽然近年来国内已有产品,但价格仍较昂贵,不易推广使用。用真空干燥器充以含5—10%二氧化碳的空气来代替二氧化碳培养箱可以达到同样目的,这种方法目前已为国内许多实验室所采用。

    (来源: 上海喆图科学仪器有限公司


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