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    线粒体膜电位荧光探针JC-10

    西安百萤生物科技有限公司2018年11月2日 10:15 点击:233

    基本信息

    货号:22204

    储存条件:-20℃避光干燥

    保质期:自收到起6个月

     

    简介

    尽管JC-1在许多实验室中被广泛使用,但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。?#35789;?#22312;1μM浓度下,JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度?#20445;?/span>JC-10已被开发为JC-1的替代物。与JC-1相比,我们的JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体,并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这?#20013;?#36136;是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm(即JC-10单体形式的发射)转变为570nm(即J-聚集体形式的发射)。当在490nm激发?#20445;?#38543;着线粒体膜变得更加极化,JC-10?#38590;?#33394;从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1FL1)中分析绿色发射,在通道2FL2)中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外,JC-10还可用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光微?#35013;?#24179;台中使用JC-10的方案。在一些细胞系中,JC-10具有甚至优于JC-1的性能。

     

    物理化学特性

    分子量:~600

    储存方式:DMSO

    Ex=515nm

    Em=529527nm

     

    JC-10的分析方案

    简要概括

    准备含有测试化合物的细胞?

    添加JC-10工作溶液(100μL/孔用于96?#35013;?#25110;25μL/孔用于384?#35013;澹?

    在室温或37 ℃孵育1小时?

    Ex读取荧光强度 / Em = 490 / 525nm540 / 590nm

    注意:以下是我们推荐的活细胞方案。 该协议仅提供指南,应根据您的特定需求进行修改。

     

    操作步骤

    1. 准备JC-10工作溶液:

    1.1?#31185;緿MSO原液(100μL,2 mg / mL,3 mM)只能使用一次。任何?#35789;?#29992;的小瓶应储存在<-20。注意:避免反复?#27225;?#24490;环,并避光.

    1.2准备1X JC-10工作溶液:在实验当天,解冻一份JC-10 stockolution到室温。在Hanks和20 mM Hepesbuffer(HHBS)或您选择的缓冲液(pH 7-8,含0.02%Pluronic [表情] F-127)中制备10至30μM1X工作溶液。通过votexing将它们混合均?#21462;?#27880;意:对于某些细胞系,pH值为8的工作溶液可能会阻止JC-10泄漏。

    2.用荧光酶标仪进行JC-10检测:

    2.1用测试化合物处理细胞?#27426;?#25152;需的时间(例如,Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小?#20445;?#20197;诱导细胞凋亡。 对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相应量的化合物缓冲液。

    2.2将100μL/孔/ 96?#35013;?#25110;25μL/孔/ 384?#35013;?#30340;JC-10工作溶液(来自步骤1.2)加入到细胞板中。

    2.3将JC-10加载板在37 oC,5%CO2培养箱中孵育15-60分钟。

    注意:?#23454;?#30340;孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

    2.4监测Ex / Em = 490/525 nm(FITC通道)和540/590 nm(TRITC通道)的荧光变化,进行比率分析。

    可选:从板上取下JC-10工作溶液; 在分析之前,将100μL/孔/ 96?#35013;?#25110;25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

    3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-10检测:

    3.1用测试化合物处理细胞?#27426;?#25152;需的时间(例如,Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小?#20445;?#20197;诱导细胞凋亡。

    3.2离心细胞,每管取1-5×105个细胞。

    3.3将细胞重悬于500μLJC-10工作溶液中(来自步骤1.2)。

    3.4在室温或37°C5CO2培养箱中孵育1030分钟,避光。

    注意:?#23454;?#30340;孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

    3.5使用荧光显微镜(使用FITCTRITC过滤器)或流式细胞仪(使用FL1FL2通道)监测Ex / Em = 490/525 nm540/590 nm处的荧光变化。可选:移除JC-10工作 从板上解决; 在荧光显微镜下分析之前,将100μL// 96?#35013;?#25110;25μL// 384HHBS板加回到细胞板中。


    (来源: 西安百萤生物科技有限公司


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