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    酶标试剂及酶标仪使用技巧

    生物通2007年11月1日 17:31 点击:1936

     

    酶标仪使用注意事项
    1、 工作环境
    酶标仪是一种精密的光学仪器,因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性,还能够延长其使用寿命。
    A. 仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。
    B. 仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。
    C. 为延缓光学部件的老化,应避免阳光直射。
    D. 操作环境温度应在15°C~40°C之间,环境湿度在15%~85%之间。
    E. 操作时电压应保持稳定。
    F. 操作环境空气清洁,避免水汽、烟尘。
    G. 保持干燥、干净、水平的工作台面,以及足够的操作空间。

    2、 操作注意事项
    许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果,操作过程随意性较大,在使用酶标仪后操作必须规范。
    A. 使用移液器加液,移液枪头不能混用。
    B. 洗板要干净,避免交叉污染。
    C. 严格按照试剂盒的说明书操作,反应时间准确。
    D. 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部,操作完成注意做好清洁工作。
    E. 不要在测量过程中关闭电源。
    F. 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实?#26159;?#20917;及时修改参数,以达到最佳效果。
    G. 使用后盖好防尘罩。
    H. 出现技术?#25910;?#26102;应及时与厂家联系,切勿擅自拆卸酶标仪。

    酶标(ELISA,EIA)诊断试剂盒操作中出现的问题:现象、可能原因和解决办法

    现象 可能原因 解决方法
    显色淡、灵敏度偏低 试剂盒没有按规定保存,受高温影响 不要将试剂盒长时间置于室温下,按使用规定储藏
    试剂盒超过?#34892;?#26399; 不要使用
    试剂、样品使用前未能平衡 用前试剂、样品置室温平衡30?#31181;?/TD>
    移液器计量不准,吸嘴(tips)不清洁或含水份 校正移液器,移液器与吸嘴配合要紧密吻合,移液不宜太快,排放应完全,吸嘴最好一次性使用
    恒温箱或孵育温度不到37°C 注意温度并及时调节,不宜多打开机盖
    保温时间不够 要准确定时
    洗涤冲击力太大,洗液浸泡时间太长,洗涤次数过多 ?#27492;?#26126;书要求注意控制洗涤冲击力,洗涤时间和洗涤次数
    显色剂加量不足或顺序颠?#22815;駻、B液混合后加入 滴加显色剂时滴瓶应垂?#20445;?#25345;力均匀,先加A再加B,不可混合后加入;必要时用移液器加液
    底物(显色液)作用时间不够 准确定时
    蒸馏水水质有问题 测定蒸馏水水质
    样品用了防腐剂(NaN3),?#31181;?#20102;酶的反应 样品不能用防腐剂
    重复性差 样品数量不一,加样时间长短不一 重复某一样品?#20445;?#21152;样尽可能与第一次接近
    样品加入后未混匀 加样后充分混匀(或混匀后加样)
    酶标滤光片不对或输入波长不对 TMB用450/630,PNPP用405/630波长
    酶标仪测定重复性差 校对酶标仪并注意清洁
    洗涤不正确 自动洗板时不应?#21368;?#23380;,洗涤液注满各孔而又不要溢出,洗涤充分,残留量少
    温育条件不一致(一次水浴,一次用温箱) 恒温较水浴显色深
    不慎多加或少加酶或显色剂,操作过程个别孔液体外溅,酶、显色剂滴于孔壁上 多加显色深,少加则浅,防止液体外溅,用吸水纸吸干孔壁上残留的酶或显色剂
    不同批号试剂盒中组份混淆使用 尽量不要将不同批号试剂混合使用
    阈值附近时阴时阳 同一样品做三个或多个复孔,以二个以上相同者为准
    加样量、保温时间、洗涤、操作人员不一致 尽可能使用同一移液器和装紧吸嘴重复测定标本,条件、人员应尽量与?#27927;?#20445;持一致
    阳性对照不显色,出现一片白 蒸馏水有问题 与好的蒸馏水比较
    洗液配制有误 ?#27492;?#26126;书配制
    ?#32617;?#28082;误作洗液稀释或当底物缓冲液配制 ?#30475;?#37197;制时注意看请试剂标签
    漏加酶或显色剂 不要漏加,注意观察?#22909;?#39640;度
    某一容器未洗净,残留有灭活酶物质 使用的容器要洁净、可靠
    全部呈有色 水质问题 防止蒸馏水污染
    加酶量过多 注意检查移液器及设定加样量
    温度超过37°C,或酶结合时间或显色时间超过 注意温度和时间
    洗涤不充分,样品中有其它成分残留,或有残留酶 充分洗涤,减少残留
    底物(显色液)配制时间过长,受光照或受污染 ?#27492;?#26126;书严格操作并需避光
    样品放置时间过长,污染 样品应保?#20013;?#40092;,或低温保存,防止污染
    移液吸嘴重复使用,未洗净或消毒不完全而用于加酶或底物 吸嘴尽可能一次性使用
    花板 操作不慎 ?#27492;?#26126;书洗板,加样,显色
    洗针堵孔,残留液较多,加或吸洗液不均匀 检查洗针并进行调整
    样品离心处理不完全,?#24515;?#34880;或残留细胞成分 离心3000rpm 6?#31181;?#20197;上
    显色顺序前后不均 样品量过大,加试剂时间过长,反应时间不一致(特别是对于反应时间短的试剂盒) 注意控制加样的时间

    注意:
    1、 不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同,务必按照所用试剂盒严格操作,否则容易产生检测结果的不确定性。
    2、 若不同批号试剂的不同组分(A液或酶工作液),或不同试剂的不同组分进行交叉使用,有可能出现显色浅或本底高,花板等情形。
    3、 加样时样品量误差,对于阴或很阳的标本影响不大,但对阈值附近的标本影响极大,建议校对加样器。
    4、 反应时间的误差,做大量标本?#20445;?#31532;一孔和最后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
    5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加样器,不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀,是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。
    6、 阈值附近实际上是个?#20202;╣ray scale),不能截?#29615;?#20026;阴性、阳性,国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检,以次数多者为准,如一次阳两次阴最后判为阴,但实际上是否为阴不好说,只?#20449;?#20026;可疑,临?#37319;?#21487;以?#27809;?#32773;过一段时间后再测。
    7、 肉眼观察稍显色,酶标仪打印为阴性的标本在实?#20351;?#20316;中是难?#21592;?#20813;的,肉眼目测结果不可靠,应以酶标仪判读为准。
    8、 由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。
    9、 临界值附近标本波动为正常现象,任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。

    (来源: 生物通 )


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