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    比色分析的基本原理

    互联网2008年10月9日 12:04 点击:4547

    许多化学物质的溶液具有颜色(无色的化合物也可以加显色剂经反应生成有色物质),当有色溶液的溶度改变时,颜色的深浅也随之改变,浓度愈大,颜色愈深。因此,可以用比较溶液颜色深浅的方法来测定有色溶液的浓度。这种方法叫做比色分析法。

    一、 朗伯—比尔定律

    当一束单色光通过有色溶液时,入射光线的一部分被器皿反射回来,一部分被溶液吸收,另一部分则透过溶液,如图所示。它们之间有以下关系:

    Io=Ia+Ir+It 1-1


    式中:Io—入射光强度

    Ia—吸收光强度

    Ir—反射光强度

    It—透过光强度

    由于在实际测定时,所用的比色皿?#38469;?#21516;质料用规格的。反射光的强度为一定值,不会引起测量误差,所以反射光的影响可以不加考虑。则上式可简化为:

    Io=Ia+It 1-2

    从式1-2可知:?#27604;?#23556;光强度Io为一定时,被吸收光强度Ia愈大,则透过光强度It愈小。也就是说:光强度的减弱仅与有色溶液对光线的吸收有关。

    那么,溶液对光线的吸收与哪些因素有关呢?实验证明:溶液的浓度C愈大,液层厚度L愈厚(即光线在溶液中所经过的路程愈长),则溶液对光线吸收的愈多。它们之间的关系有下式决定:


    lg = KCL 1-3


    这个公式就是朗伯—比尔(Lambert---Beer)定律。

    公式中的K称为吸光系数,它表示有色溶液在单位浓度和单位厚度时的吸光度。在入射光的波长、溶液种类和温度一定的条件下,K为定值。吸光系数是有色化合物的重要特性之一,在比色分析中有着重要的意义。K值愈大,表示该物质对光的吸收能力愈强,浓度改变时引起吸光度的改变愈显著,因此比色测定时灵敏度愈高。

    朗伯-比尔定律即有色溶液对一定强度光的吸收程度,与液层厚度和溶液中有色物质浓度的乘积成正比。其中朗伯定律说明吸收光与厚度间的关系;比尔定律说明吸收光与浓度间的关系。

    朗伯—比尔定律在光电比色计中的应用

    假定有两种有色溶液,其中一?#36136;?#24050;知浓度的标准溶液,另一?#36136;?#24453;测溶液。根据公式:

    在标准溶液中:As=KsCsLs 1-4

    在待测溶液中:Ax=kxCxLx 1-5

    将式1-4除以式1-5可得:

    = 1-6

    如果上述两种溶液的液层厚度相等、温度相同而且是同一种物质的两种不同浓度的溶液,测定时所选用的单色光的波长亦相同,则有:

    Ls=Lx、Ks=Kx ,代入式1-6可得:

    = 1-7


    由此可见,在上述条件下,吸光度与浓度成正比。这一关系式就是光电比色计的设计依据,也是比色分析的基本计算公式之一。式中标准溶液的浓度Cs为已知,As和Ax可用光电比色计测量出来,则待测溶液的浓度Cx即可求出:

    Cx = × Cs 1-8

    由于在实际测定时,标准溶液和待测溶液都要加以稀释,而?#20197;?#25253;告结果时,多以100毫升(或1000毫升)中的含量来表示。因此,在实际计算时,就需要在上式中乘上稀释因数。

    求待测溶液浓度的方法有:直接比较法(计算法)、因数法和标?#35760;?#32447;法三种。这些方法在“生物化学及生物化学检验技术”课程中有介绍。

    波长的选择:

    由于有色溶液对光的吸收具有选择性,因此进行比色测定时,滤光片必须加以选择,否则灵敏度很低,导致测量结果不准确。选择滤光的一般原则是:滤光片最大透过的光线应该是溶液最大吸收的光线。从颜色上看,滤光片的颜色与待测溶液的颜色应为“互补色”。

    什么叫做互补色呢?凡是两种颜色相加后能得到白色,则此两种颜色就称为“互补色”,图中直接相对的两种颜色,均为互补色。

    为什么选择滤光片时,要使滤光片的颜色与待测溶液的颜色为互补色呢?这是因为滤光片和有色溶液具有相似的透光特性,与它们本身颜色相同的色光,能够最大限度地透过。而与它们本身颜色成互补的色光都能被最大地吸收。
     

    (来源: 互联网 )


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