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    紫外可见分光光度计原理[实验教学中心]

    广东药学中山校区实验教学中心2008年3月13日 12:25 点击:6693

    紫外可见分光光度计原理
    分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后,发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱,反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光?#35745;?#20877;结合其它手段进行定性分析。
    根据Lambert-Beer定律:A=εbc,(A为吸光度,ε为摩尔吸光系数,为液池厚度,c为溶液浓度)可以对溶液进行定量分析。

    你可以用紫外可见分光光度计测定定三种农药的波长在某溶液中的最大、最小吸收波长。

    配制溶液-在光谱检测项下进行-调整检测光谱?#27573;?#21450;速度--扫描光谱图--吸光度最大处对应波长为最大吸收波长,吸光度最小处对应的波长为最小吸收波长。 

     UV765紫外可见分光光度计操作规程

    一、开机

    开机前将样品室内的干燥剂取出,确认电源是否连接。打开仪器电源开关,等待仪器自检通过,自检过程中禁止打开样品室。

    二、使用

    自检结束后(7个项目均出现OK字样),仪器进入主菜单,屏幕显示如下七个功能项:1.光度测量;2.光谱测量;3.定量测量;4.动力学测量;5.数据处理;6.多波长测定;7.系统状态设定。仪器经30min热稳定后,就可以进入正常测量。

    1.光度测量   测定?#27426;?#27874;长下的透光率(T%)或吸光度值(A)

    在主菜单中选中[光度测量]项后,按[ENTER]键进入此功能块 [GOTO WL]键进入波长设置用数字键输入你所需的波长值[ENTER]键确认屏幕提示:请稍等……,仪器自动将波长移动到你所需测定的波长值[F1]键,选择测定透光率(T%)或吸光度值(A)打开样品室盖,将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架R位和S1位,关上样品室盖[F3]键,仪器自动将比色皿架R位置移动到光?#20998;校?#21363;空白溶液),屏幕上显示Cell=R [AUTO ZERO]键,仪器自动对空白溶液调零。屏幕提示:请稍等…… [F2]键,比色皿架移动到S1(待测样品),屏幕上显示Cell=S1 [F4]测量T%或A

    测量完成后

    1打印输出数据,按[START/STOP]

    2返回主菜单,按[MODE]

    2. 光谱测量  波长扫描或光谱扫描,可直接测定?#27426;?#27874;长?#27573;?#20869;的光谱图和峰值谷值数据

    在主菜单中选中[光谱测量]项后,按[ENTER]键进入此功能块 根据需要设定测量模式、扫描?#27573;А?#35760;录?#27573;А?#25195;描速度、采样间隔、扫描次数、显示模式各参数。按[→][←][↑][↓]方向键到达设定行,进行参数的修?#27169;?#24182;按[ENTER]确认 打开样品室盖,将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架R位和S1位,关上样品室盖[F3]键,仪器自动将比色皿架R位置移动到光?#20998;校?#21363;空白溶液),屏幕上显示Cell=R [F1]键进行基线校正。屏幕提示:基线校正…… [F2]键,比色皿架移动到S1(待测样品),屏幕上显示Cell=S1 [START/STOP]开始光谱扫描 屏幕显示扫描?#35745;?/span>

    扫描结束后

    1) 打印结果谱图,按[F4]

    2) 直接读取峰谷值,按[F2]键,屏幕显示“请输入峰/谷检测灵敏度”(默?#29616;?#20026;3),按[ENTER]确认

    3) 存储?#35745;祝?#33719;取整个波长?#27573;?#20869;的数据,按[F3]键,用[→][←]方向键选择10个数字和26个字母组成文件名,按[ENTER]确认,按[F4]存储,按18数字键确定文件序列号

    4) 修改谱图坐标?#27573;В?#25353;[F1]。修改完毕后,按[START/STOP]确认后,谱图将按新设定坐标被刷新

    5) 返回上一级菜单,按[MODE]

    3. 定量测定  建立浓度曲线,直接测定样品的浓度

    主菜单中选中[定量测定]项后,按[ENTER]键进入此功能块 根据需要设定测量波长、测量单位、测量方法各参数。按[→][←][↑][↓]方向键到达设定行,进行参数的修?#27169;?#24182;按[ENTER]确认

    3.1 K系数法 已知斜率k和截距b,测出样品的吸光度值后待入公式就可算出浓度值

    在测量方法中选择K系数法,并按[ENTER]确认 [F2],将k值和b值输入,按[ENTER]确认 打开样品室盖,在当前光路的比色皿架位中放入空白样品,关上样品室盖 [AUTO ZERO]调零 将样品放入比色皿架中 [START/STOP]进入数据测量界面[F2]键移动比色皿架,使被测样品处于光?#20998;?/span>   [START/STOP]测量

    3.2单点标定法 测量一个标准样品的吸光度与坐标零点建立工作曲线,测定未知样品浓度

    在测量方法中选择单点标定法,并按[ENTER]确认 [F2]修改单点 ?#35789;?#23383;键输入标准样品的浓度值 [ENTER] 打开样品室盖,在当前光路的比色皿架位中放入空白样品,关上样品室盖 [AUTO ZERO]调零 将空白样品换成标准样品  [START/STOP]测量标样的吸光度并显示 将样品放入比色皿架中 [START/STOP]进入样品测量界面 [F2]键移动比色皿架,使被测样品处于光?#20998;?/span>   [START/STOP]测量

    3.3多点标定法 测量已知浓度的一系列标准样品吸光度,建立工作曲线来测定未知浓度

    在测量方法中选择多点标定法,并按[ENTER]确认 打开样品室盖,在当前光路的比色皿架位中放入空白样品,关上样品室盖 [AUTO ZERO]调零 [F2]重新标定 ?#35789;?#23383;键输入标准样品数 [ENTER]确认 将标准样品?#26469;?#25918;入比色皿架RS1S2位……关上样品室盖 [F3]移动比色皿架R位到光路 [ENTER]确认 ?#35789;?#23383;键输入标样浓度值,按[ENTER]确认 [START/STOP]测量标样的吸光度[ENTER]确认 [F2]移样品位S1到光路,同样的方法测量所有标样的吸光度 [F1]键生成方程曲线,显示该曲线的斜率k、截距b、相关系数R → [MODE]键返回定量测量菜单  [START/STOP]进入数据测量菜单  放入样品 [F2]键移动比色皿架,使被测样品处于光?#20998;?/span>   [START/STOP]测量

    6.多波长测定  同时测定几个波长下的透光率(T%)或吸光度值(A)

    主菜单中选中[多波长测定]项后,按[ENTER]键进入此功能块 [F3]键设定测量波长数目和样品池个数,按[ENTER]确定 ?#35789;?#23383;键输入相应波长值 打开样品室盖,将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架RS1S2位……,关上样品室盖 [START/STOP]开始测量

    测量完成后

    1打印输出数据,按[F4]

    2返回主菜单,按[MODE]

    三、关机

    将比色皿中的溶液倒尽,然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净,倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内,盖上防尘罩,做好使用登记,得到管理老师认可方可离开。 

    注意事项:

    1.开机前将样品室内的干燥剂取出,仪器自检过程中禁止打开样品室盖。
    2.
    比色皿内溶液以皿高的2/3 (来源: 广东药学中山校区实验教学中心 )



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