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    氟喹诺酮检测试剂盒说明书

    博奥通科科技(?#26412;?#26377;限公司2010年1月7日 13:36 点击:1225

    注意:在使用前请认真阅读说明书(请以英文为准,中文仅供参考)
    适用
    Abraxis氟喹诺酮检测试剂盒适用于检测食物产品中氟喹诺酮的含量。
    原理
    Abraxis 氟喹诺酮检测试剂盒的原理是竞争酶联免疫反应。利用提取液通过震荡萃取从样品中提取氟喹诺
    酮。然后经稀释、过滤、待测。在固相载体微孔板中加入氟喹诺酮-HRP 酶结合物,然后加入标准和处理的
    样品,然后再加入氟喹诺酮?#22266;?#24341;发反应。孵育10 分,样品中的氟喹诺酮和酶标氟喹诺酮竞争于氟喹诺
    酮?#22266;?#21453;应,氟喹诺酮?#22266;?#21644;微孔结?#31232;?#27927;板除去没有反应的试剂。加入底物显色剂、无色的显色剂转化
    为蓝色的产物;孵育30 分钟后加入反应终止液终止反应,颜色由蓝色变为黄色;在450nm波长进行检测,
    样品中的氟喹诺酮浓度与吸收光强度成反?#21462;?br /> 特异性
    Abraxis氟喹诺酮检测试剂盒不能区分不同种类的氟喹诺酮,检测不同的氟喹诺酮交叉?#23460;?#19981;同。以下是试
    剂盒对不同的氟喹诺酮的交叉反应列表。
    检测限
    肉、鱼虾: 1 ppb
    蜂蜜: 2 ppb
    试剂盒组成
    试剂盒保存在2-8摄氏?#21462;?#22312;?#34892;?#26399;内都可以使用
    1、96孔酶标板:1块(12×8条)。
    2、氟喹诺酮标准品贮备液(Standard): 6瓶(1ml/瓶),浓度分别为0, 0.2, 0.8, 3.2 6.4 和16 μg/L (ppb)
    3、氟喹诺酮HRP酶标记物:1瓶(6ml)
    4、兔抗氟喹诺酮?#22266;澹?瓶(6ml)
    5、5X 浓缩洗液:1瓶(100ml)
    6、底物显色液:1瓶(12ml)
    7、终止液:1瓶(12ml 、1N HCl)。
    8、使用说明书
    注意事项
    1.最?#38376;?#22871;使用所提供的试剂,不要同其它公司的产品混用,不要将不同批次的产品混用。
    2.样品稀释或含有杂质很可能对结果的准确性有影响。
    3.不要使用过期的产品。
    4.使用之前将所有试剂回升至室温20-28ºC.不要在室温放置超过24 小时。
    5. 氟喹诺酮是抗生素,小心对待。
    6. 停止液是1N 盐酸,避免接触皮肤。如果接触请用大量的水冲洗。
    7. 洗液是5X浓缩的,在使用时要用无离子水稀释(如100ml洗液加400ml无离子水),用稀释后的溶
    液洗板
    试剂盒未提供的材料
    1、蒸馏水或无离子水
    2、量筒100ml
    3、烧杯(样品提取和收集)
    4、离心机
    5、移液器50 μL
    6、50 and 100 μL 8 道移液器
    7、吸水纸
    8、450nm 酶标仪
    9、计时器
    10. 搅拌器
    11. SPE C18 Column 200mg/3mL
    12. 乙腈
    13. 乙腈
    14. 洗瓶
    15. 乙腈
    16. HCl
    17. 乙腈
    18. 10 mM PBS, [0.31 g NaH2PO4-2H2O+ 2.87 g Na2HPO4-12H2O + 9 g NaCl,加无离子水定容到一升。
    样品处理
    肉样
    1.匀浆化样品。
    2.在50ml的离心管中加入5克匀浆化的样品,再加入10 ml乙腈
    3.剧烈震荡5分钟
    4.室温3000转离心5分钟
    5.取2ml上清液到一个干净的玻璃试管中,用氮气吹干。
    6.然后加入2ml?#21644;椋?#21095;烈震荡1分钟,再加入2 mL10 mM PBS混?#21462;?br /> 7.室温3000转离心5分钟。
    8.移除上层液体。
    9.把下层液体转移到一个新的管中,待测。
    蜂蜜样品(1:2 稀释)
    1.在一个15ml 的带螺旋盖的玻璃瓶中加入1g 蜂蜜。
    2.加入5 ml 1 M HCl 剧烈震荡混?#21462;?br /> 3.室温3000转离心5分钟。
    4.用6ml 甲醇和6ml水前处理C18 柱。
    5.把第三步骤的清澈的样品萃取液过柱(flow rate: 15 drops/min)。
    6.用3 ml 水和3 ml 5% 甲醇/水溶液洗柱。
    7.用弱的氮气流吹2 min清除残留的水样。
    8.用5%的乙酸/甲醇溶液洗脱(flow rate: 15 drops/min)
    9.用氮气吹干洗脱液。
    10.用2 ml 10 mM PBS 溶解干燥的萃取物,剧?#19968;煸取?br /> 11.待测,检测结果乘以稀释倍数2。
    操作步骤
    注意:标准和样品做平行可以增加精密度和准确度
    1、使用前将试剂盒和样品处理物提前从冰箱中拿出来使其达到室温。
    2、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条,放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
    3、在对应的微孔中加入50μL 1:10 稀释后的标准和样品,确保吸头要干净。
    4、每个测试孔?#25216;?#20837;50 μL酶结合物
    5、每个测试孔?#25216;?#20837;50 μL?#22266;?#28342;液
    6、孵育30分钟
    7、孵育完成后,将微孔中的溶液倒入水槽中,用1X 洗液加满微孔然后倒掉,重复三次,总共四次洗板。
    8、在最后一次洗板后拍板,去掉残留的洗液。
    9、每个测试孔加入100μL底物。
    10、孵育30分钟
    10、每个测试孔加入100μL终止液。
    11、450nm 下读取每个孔的吸光度值(OD)。
    结果分析
    1.半定量结果的判定,可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定,样品的吸光度值低于某个标准
    的吸光度值,则说明样品的氟喹诺酮含量大于此标准的浓度,样品的吸光度值高于某个标准的吸光度
    值,则说明样品的氟喹诺酮含量小于此标准的浓?#21462;?br /> 2.定量结果判定,需要以标准的吸光度值为X轴,标准浓度的对数为Y轴绘制曲线图,将标准浓度吸光
    度值的点用直线连接,样品的吸光度值?#21442;?#20110;这条直线上,根据样品的吸光度值在Y轴上即可?#19994;?#30456;
    应样品的浓度,如果样品的吸光度?#33633;?#20110;最小标准的吸光度值或小于最大标准的吸光度值,即可说明
    ?#25628;?#21697;中氟喹诺酮的含量小于0.2ppb 或大于16ppb。

    (来源: 博奥通科科技(?#26412;?#26377;限公司


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