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    热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

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    高分辨率熔解曲线(HRM)分析预混Mix(PCR),精准基因筛查!

    武汉艾美捷科技有限公司2019年3月6日 9:00 点击:475


    高分辨率熔解曲线分析(high resolution melting analysis,HRM)是国际上发展的一种新型的检测单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)及扫描突变的新?#38469;酢RM 无需使用序列特异性探针,而是利用一种饱和染料对 PCR 反应产物进行分析。

    HRM?#38469;?#22240;操作简便快捷、成本低廉、结果准确,并且实现了真正的?#23637;?#25805;作而受到普遍关注。

     

    HRM原理: 

    PCR反应前将新型DNA饱和荧光染料加入反应体系,然后将PCR产物直接导入高分辨熔解分析仪中,在一定的温?#30830;?#22260;内将PCR扩增产物进行加热变性,仪器的光学检测?#20302;?#37319;集、分析荧光信号并绘制温度熔解曲线,根据不同熔解曲线形状来区分(单个)碱基差异。 

    最广泛的 HRM 分析应用领域是基因筛查。基因筛查是搜索 PCR 扩增片段中是否存在未知变异,它可在测序步骤之前进行或者作为替代测序方法。由于 PCR 产物突变可导致 DNA 熔解曲线的形状改变,因此它可以利用 HRM分析检测。杂交双链 DNA 样本扩增并熔解时,其熔解曲线不同于纯合野生型或突变样本。如果操作得当,可以减少至少95%的测序工作量。随着DNA染料和分析仪器的发展,HRM?#38469;?#36824;将继续完善和改进,在遗传病分子诊断领域发挥更多的作用。 

     

    HRM应用: 

    ? 基因筛查 (突变研究)

    ? 杂合性研究

    ? 突变分析

    ? 物种鉴定

    ? 单核苷酸多态性 (SNP) 检测

    ? 甲基化分析

     

    作为专注于PCR领域超过24年的高?#20998;?#35797;剂供应商,Solis BioDyne为您推荐,5X热启动EvaGreen高分辨率熔解曲线分析-预混Mix(PCR): 

    名称

    货号

    兼容的PCR仪器

    5x HOT FIREPol EvaGreen HRM Mix (NO ROX)

    08-31-00001

    Bio-Rad: CFX96? & CFX384?
    Qiagen: Rotor-Gene? 6000
    Eppendorf: Mastercycler?: ep realplex2 & ep realplex4
    Illumina: The Eco?
    Roche: LightCycler? 480

    * 不含参?#28909;?#26009;ROX,如需要含ROX,请选择:08-33-00001

    5X热启动EvaGreen高分辨率熔解曲线分析-预混Mix(PCR)提供如下组分:

    1

    极高的性价比(进口?#20998;剩?#22269;产价格): 

    品牌

    货号

    规格

    目录价(元)

    单次反应价格(元)

    Solis BioDyne

    08-31-00001

    1ml(250次)

    386

    1.54

    Thermo

    4415452

    5*5ml(2500次)

    18856

    7.54

    Qiagen

    206546

    25ml(2000次)

    21810

    10.9

    DBI

    DBI-2232

    1000次

    11000

    11

    天根(Tiangen)

    FP210-02

    500次

    2480

    4.96

    宇恒生物(UE)

    S2013

    500次

    2300

    4.6

    推荐的qPCR反应体系配置: 

    组分

    体积

    终浓度

    5x HOT FIREPol? EvaGreen? HRM Mix

    4 μl

    1x

    正向引物 (10 pmol/μl)

    0.16-0.5 μl

    80-250 nM

    反向引物 (10 pmol/μl)

    0.16-0.5 μl

    80-250 nM

    DNA模板

    可变

    可变

    H2O(PCR级)

    up to 20 μl

     

    Total

    20 μl

     

    * DNA模板浓度:cDNA 0.1 pg/μl -10 ng/μl ; gDNA 10 pg/μl – 4 ng/μl

    推荐的qPCR反应程序: 

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    起?#25216;?#27963;(热启动)

    95oC

    12 min

    1

    变性

     95oC

    15 s

    40

    退火

    60o-65oC

    20 s

    ?#30001;?/span>

    72oC

    20 s

     

    发表文?#29575;?#39564;结果展示:

    1】Negrisolo, Susanna et al. “Could the interaction between LMX1B and PAX2 influence the severity of renal symptoms?” European Journal of Human Genetics 26 (2018): 1708-1712.

    使用Solis试剂盒,分析PAX2基因4号外显子的错义突变

    2】Gaczkowska, Agnieszka, et al. “Association of CDKAL1 Nucleotide Variants with the Risk of Non-Syndromic Cleft Lip with or without Cleft Palate.” Journal of Human Genetics, vol. 63, no. 4, 2018, pp. 397–406.

    使用Solis试剂盒,分析CDKAL1基因SNP

    HRM分析成功的关键: 

    1.保持较短的扩增片段,实现最高的灵敏度。与较大的扩增片段相比,100 bp 左右的扩增片段可简化单核苷酸熔解曲线的检测。

    2.确保 PCR 扩增片段的特异性。错配产物和引物二聚体可使数据解释复杂化。引物浓度低于 200nM,MgCl2 在 1.5 mM至3 mM 范围及使用热启动DNA 聚合酶将有助于获得高特异性。

    3.确保反应使用足够的模板。一般而言,Ct 应低于30,以生成足够的材料,实现准确的熔解分析。 

    除了上述的高效稳健的HRM分析预混Mix产品,Solis BioDyne为?#31361;?#25552;供终点PCR(end-point PCR),qPCR(real-time PCR),反转录PCR(Reverse transcription),以及其它PCR所需的配?#36164;?#21058;。产品线纵览图如下:

     

    Solis BioDyne来源于欧盟-爱沙尼亚共和国,专注PCR领域超过24年,Solis BioDyne一直致力于开发和生产高?#20998;?#30340;生命科学试剂,现已成为当今?#20998;?#39046;先的试剂供应商之一。高标准的生产标准和服务使Solis BioDyne成为全球值得信赖的首选PCR供应商。我们的DNA聚合酶,PCR Master Mixes,qPCR Mixes和其它试剂被全球110多个国家的研?#31354;?#25152;使用,包括顶级研究机?#36141;?#29983;物?#38469;?#20844;司。 

    Solis BioDyne拥有独家的蛋白质稳定?#38469;?#19987;利,确保其PCR酶与PCR Mixes产品具有极高的稳定性,研?#31354;?#21487;以常温运输以及常温下配置PCR反应体系(无需冰盒)。?#35789;?#26159;室温放置30天,其酶活性也没有损耗。 

    作为Solis BioDyne在中国的区域总代理,艾美捷科技有限公司将为中国?#31361;?#25552;供最全面的Solis BioDyne产品以及订?#21697;?#21153;。

     


    (来源: 武汉艾美捷科技有限公司


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