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    小鼠胰岛素(Insulin)ELISA试剂盒使用说明书

    厦门慧嘉生物科技有限公司2010年1月3日 20:13 点击:2164

    小鼠胰岛素(Insulin)ELISA试剂盒使用说明书

    本试剂盒仅供研究使用。

    检测范围:                                                          96T

    30pg/ml-800pg/ml

     

    使用目的:

    本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量

    实验原理

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中?#26469;?#21152;入胰岛素(Insulin)再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)?#25910;?#30456;关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)浓度。

    试剂盒组成

    1

    30倍浓缩洗涤液

    20ml×1

    7

    终止液

    6ml×1

    2

    酶标试剂

    6ml×1

    8

    标准品(1600pg/ml

    0.5ml×1

    3

    酶标包被板

    12孔×8

    9

    标准品稀释液

    1.5ml×1

    4

    样品稀释液

    6ml×1

    10

    说明书

    1

    5

    显色剂A

    6ml×1

    11

    封板膜

    2 

    6

    显色剂B

    6ml×1/

    12

    密封袋

    1

    标本要求

    1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融

    2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步骤

    1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

    800pg/ml

    5号标准品

    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

    400pg/ml

    4号标准品

    150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

    200pg/ml

    3号标准品

    150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

    100pg/ml

    2号标准品

    150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

    50pg/ml

    1号标准品

    150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

     

     

    2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混?#21462;?/span>

    3.         温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。  

    4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

    5.         洗涤:小心?#19994;?#23553;板膜,弃去液体,甩干,每?#20934;?#28385;洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

    6.         ?#29992;福?#27599;?#20934;?#20837;酶标试剂50μl,空白孔除外。

    7.         温育:操作同3

    8.         洗涤:操作同5

    9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.

    10.     终止:每?#20934;?#32456;止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11.     测定:以空白空调零,450nm



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