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    酶联免疫试剂盒原理及技术标准

    http://www.shjmsw.com/weikang-Article-14759/2010年1月18日 14:56 点击:1807

    酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理,能测量人促卵泡素(FSH),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。
    酶联免疫试剂盒工作原理
    促卵泡素(FSH)是动物脑垂体分泌作用于卵巢卵泡生长、发育、?#21482;?#25104;熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透过细胞膜,FSH必须与靶细胞膜上的促卵泡素受体(FSHR)结合,经过受体介导将信息传递到靶细胞内,才能发挥其生物学功能.所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样?#20998;?#30340;待测因子?#25910;?#30456;关。
    酶联免疫试剂盒工作环境
    1. 37℃恒温箱。
    2. 标准规格酶标仪。
    3. 自动洗板机。
    4. 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
    5. 蒸馏水,容量瓶等
    6. 干净的试管和Eppendof管
    酶联免疫试剂盒操作步骤
    1. 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板?#36164;?#30446;。
    2. 将倍比稀释的标准品各0.1ml?#26469;?#21152;入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每?#20934;?#20837;。
    3. 酶标板?#30001;细牽?7℃反应90分钟。
    4. 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几?#38534;?#27927;涤2次。
    5. 将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml?#26469;?#21152;入。37℃反应60分钟。
    6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次,?#30475;?#28024;泡1分钟左右。
    7. 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml?#26469;?#21152;入。37℃反应30分钟。
    8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次,?#30475;?#28024;泡1-2分钟左右。
    9. 按每孔0.1ml?#26469;?#21152;入TMB显色工作液,37℃避光反应,反应过程中,要经常的观察,?#27604;?#30524;可见标准品的前3-4?#23376;?nbsp;   明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显时,即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应最长不要超过30分钟)。
    10. 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
    11. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户?#37096;?#20197;使?#37238;?#31181;应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。

    (来源: http://www.shjmsw.com/weikang-Article-14759/


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