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    实验动物体液采集方法

    来宝网2007年12月4日 15:19 点击:1423

    一、 血液的采集常用的采血方法有割(剪)尾采血、眼眶静脉丛采血、断头采血、心脏采血、颈静脉(动脉)采血、股动脉(静脉)采血、耳静脉采血、前肢头静脉才学、后肢小静脉采血等。
    二、尿液的采集

    实验动物的尿液常用代谢笼采集,?#37096;?#36890;过其他装置来采集。

    (一)、用代谢笼采集尿液

    代谢笼用于收集实验动物自然排出的尿液,是一种特别设计的为采集实验动物各种排泄物的密封式饲养笼,有的代谢笼除可收集尿液外,又可收集粪便和动物呼出的CO2。一般简单的代谢笼主要用来收集尿液。防在代谢笼内饲养的实验动物,可通过其特殊装置收集尿液。

    (二)、导尿法收集尿液

    施行导尿术,较?#23460;?#20110;犬、猴等大动物。一般不需要麻醉,导尿时将实验动物?#37995;?#22266;定,用甘油润滑导尿管。对雄性动物,操作员用一只手握住阴茎,另一只手将阴茎包皮向下,暴露龟头,使尿道口张开,将导尿管缓慢插入,导尿管推进到尿道膜部时有抵抗感,此时注意动作轻柔,继续向膀胱推进导尿管,即有尿液流出。雌性动物尿道外口在阴道前庭,导尿时于阴道前庭腹侧将导尿管插入阴道外口,其后操作同雄性动物导尿术。用导尿法导尿可采集到没有污染的尿液。如果严格执行无菌操作,可收集到无菌尿液。

    (三)输尿管插管采集尿液

    一般用于要求精确计量单位时间内实验动物排尿量的实验。剖腹后,将膀胱牵拉至腹腔外,暴露膀胱底两侧的输尿管。在两侧输尿管近膀胱处用线分别结扎,于输尿管结扎处上方剪一小口,向肾脏方向分别插入充满生理盐水的插管,用线结扎固定插管,即可见尿液从插管滴出,可以收集。采尿过程中要用38℃热生理盐水纱布遮盖切口及膀?#20303;?/P>

    (四)压迫膀胱采集尿液

    实验人员用手在实验动物下腹部加压,手法既轻柔又有力。当增加的压力使实验动物膀胱括?#25216;?#26494;弛时,尿液会自动流出,即行收集。

    (五)穿刺膀胱采集尿液

    实验动物麻醉固定后,剪去下腹部耻骨联?#29616;?#19978;,腹正中线两侧的被毛,消毒后用注射针?#26041;?#27880;射器穿刺。取钝角进针,针头穿过皮肤后稍微改变角度,?#21592;?#20813;穿刺后漏尿,然后刺向膀胱方向,边缓慢进针边回抽,直到抽到尿液为止。

    (六)剖腹采集尿液

    按上述穿刺膀胱采集尿液法做术前准备,其皮肤准备范围应更大。剖腹暴露膀胱,直视下穿刺膀胱抽取尿液。?#37096;?#20110;穿刺前用无齿镊夹住部分膀胱壁,从镊子下方的膀胱壁进针抽尿。

    (七)提鼠采集尿液

    鼠类被人抓住尾巴提起即出现排尿反射,以小鼠的这种反射最明显。可以利用这一反射收集尿液。当鼠类被提起尾巴排尿后,尿滴挂在尿道外口附近的被毛上,不会马上流走,操作人员应迅速用吸管或玻璃管接住尿滴。

    三、胸水和腹水的采集

    (一)胸水的采集

    主要采用胸腔穿刺法收集实验动物的胸水,?#37096;?#22788;死实验动物剖开胸腔采集胸水。

    1. 穿刺点定位

    于实验动物腋后线第11~12肋间隙穿刺,穿刺针紧贴肋骨?#26174;担?#21542;则容易损?#27515;?#38388;神经。?#37096;?#22312;胸壁近胸骨左侧缘第4~5肋间隙穿刺。

    2. 穿刺方法

    实验动物取立位或半卧位固定,局?#31185;?#32932;去毛、消毒、麻醉,穿刺针头与注射器之间接三通连接装置,实验人员以左手拇指、食指?#20004;?#23616;?#31185;?#32932;,右手握穿刺针紧靠肋骨下缘处垂直进针,穿刺肋间肌时产生一定阻力,当阻力消失有落空感时,说明已刺入胸膜腔,用左手固定穿刺针,打开三通连接装置,缓慢抽取胸水。

    (二)腹水的采集

    实验动物被固定于站立位。局?#31185;?#32932;去毛、消毒、麻醉。用无菌止血钳小心提起皮肤,右手持小针头或穿刺套管针沿下腹部靠腹壁正中线处轻轻垂?#36125;?#20837;,注意不可刺入太深,以免损伤内脏,针头有落空感后,说明穿刺针已

    四、分泌液的采集

    (一)阴道分泌物的采集

    适于观察阴道角质化上皮细胞。

    1.  滴管冲洗法

    用消?#38236;?#31649;吸取少量生理盐水仔细、反复冲洗被检雌性动物阴道,将冲洗液吸出滴在载波片上晾干后染色镜检。?#37096;?#30452;接将冲洗液置于低?#26029;?#24494;镜下观察,根据细胞类型变化鉴别实验动物动情周期中的不同时期。

    2. 檫拭法

    用生理盐水将消毒棉拭子湿润后,挤干棉拭子上的生理盐水,轻轻插入雌性动物阴道内,沿阴道内壁檫拭、转动,然后取出并作阴道?#31185;?#36827;行镜检。

    (二)精液的采集

    1.  人工阴道套采精液法

    本法适用于犬、猪、羊等大动物,采用特制的人工阴道套?#33258;?#23454;验动物阴茎上采集精液。采精时,一手捏住阴道套,套住雄性动物的阴茎,以完全套住雄性动物的阴茎为佳,插入阴道套后,若实验动物发出低叫声,表明已经射精。此时可取下阴道套,拆下采精瓶,取出精液,迅速做有关检查。

    2.阴?#28010;?#37319;精法

    本法是将阴?#28010;ㄍ科?#26579;色,镜检凝固的精液。阴?#28010;?#26159;雄性大、小鼠的精液和雌性阴道分泌物混合,在雌鼠阴道内凝结而成白色稍透明、圆锥形的栓状物,一般交配后2~4小时即可在雌鼠阴道口形成,并可在阴道停留12~24小时。

    3.其他采精液法

    用电流等物理方法刺激雄性动物的阴茎或其他性敏感区,使雄性动物被刺激发情,直至射精,用采精瓶采集射出的精液。

    (三)乳汁的采集

    用按摩挤奶收集乳汁的方法适合犬、猪、羊等大动物乳汁的采集。选用哺乳期的实验动物,在早上采集乳汁量最多,用手指轻轻按摩实验动物乳头,使乳汁自然流出,如乳汁不能自然流出,可张开手掌从乳房基底部朝乳头方向按摩、?#36153;?#25972;个乳房,即可挤出乳汁。

    五、骨髓的采集

    采集骨髓一般选择胸骨、肋骨、髁骨、胫骨和股骨等造血功能活跃的骨组织。猴、犬、羊等大动物骨髓的采集用活体穿刺取骨髓的方法;大、小鼠等小动物骨头小难穿刺,只能剖杀后采胸骨、股骨的骨髓。

    (一)猴、犬、羊等的骨髓采集法

    1. 骨髓穿刺点定位

    (1)胸?#29301;?#31359;刺部位在胸骨中线,胸骨体与胸骨柄连接处,或选胸骨上1/3部。

    (2)?#27490;牵?#31359;刺部位在胫骨内侧,胫骨上端的下方1厘米处。

    (3)肋?#29301;?#31359;刺部位在第5~7肋骨各自的中点上。

    (4)髁?#29301;?#31359;刺部位在髁前上棘后2~3厘米的髁嵴。

    (5)股?#29301;?#31359;刺部位在股骨内侧面,靠下端的凹面处。

    2.  骨髓穿刺方法

    (1)实验动物按要求固定,穿刺部位去毛、消毒、麻醉,要求局部麻醉范围?#36125;?#39592;膜,?#37096;?#20316;全麻。

    (2)操作人员带消毒手套,确定穿刺点,估计从皮肤到骨髓的距离并?#26469;?#22266;定骨髓穿刺针长?#21462;?#24038;手拇、食指?#20004;?#31359;刺点周围皮肤,右手?#25191;?#21050;针在穿刺点垂直进针,小弧度左右旋转钻入,当有落空感时表示针尖已进入骨髓腔。用左手固定穿刺针,右手抽出针芯,连接注射器缓慢抽吸骨髓组织,当注射器内抽到少许骨髓时立即停止抽吸,取出注射器将骨髓推注到载玻片上,迅速?#31185;?#25968;张,?#21592;?#26579;色镜检。

    (3)左手压住穿刺点周围皮肤,迅速拔出穿刺针,用棉球压迫数分钟。如穿刺的是肋?#29301;?#38500;压迫止血外,还需胶布封贴穿刺点,防止发生气胸。

    (二)大鼠、小鼠的骨髓采集法

    将实验动物剖杀、固定,解剖取出股?#33108;?#33016;?#29301;?#20110;第三胸骨节处剪断,将其断面的骨髓挤在有稀释液的试管内或玻片上,继而?#31185;?#26579;色、镜检。

    (来源: 来宝网 )


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