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    临床微生物学尿培养操作规范

    来宝网2007年4月8日 20:34 点击:3605

    临床微生物学尿培养操作规范

    临床微生物学尿培养操作规范

    作者:中华医学会检验医学分会    来源:中华检验医学杂志

    一、尿液标本采集和运送
    1.    采集指征:(1)有典型的尿路感染症状;(2)肉眼脓尿或血尿;(3)尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性;(4)不明原因的发热,无其他局部症状;(5)留置导尿管的患者出现发热;(6)膀胱排空功能受损;(7)泌尿系统疾病手术前。

    2.    采集方法:标本采集应力争在?#35789;?#29992;抗生素之前.注意避免消毒剂污染标本,方法有:(1)清洁中段尿:最好留取早晨清洁中段尿标本,嘱咐患者睡前少饮水,清?#31185;?#24202;后用肥皂水清洗会阴部,女?#26434;?#29992;手分开大阴唇,?#34892;杂?#32763;上包皮.仔细清洗,再用清水冲洗尿道口周围;开始排尿,将前段尿排去,中段尿约10-20ml直接排入专用的无菌容器中,立即送检,2h内接种。该方法简单、易行,是最常用的尿培养标本收集方法,但很容?#36164;?#21040;会阴部细菌污染,应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。(2)耻骨上膀?#29366;?#21050;:使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液,是评估膀胱内细菌感?#38236;?#8220;金标准”方法,但有一定的痛苦.患者难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。(3)直接导尿:按常规方法对会阴局部进行消毒后,用导尿管直接经尿道插人膀胱,获取膀胱尿液,可减少尿液标本污染,准确地?#20174;?#33152;胱感染情况。但有可能将下尿道细菌引入膀胱,导?#24405;?#21457;感染,一般不提倡使用。(4)小儿收集包:?#26434;?#26080;自控能力的小儿可应用收集包收集尿液,这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性,所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性,应结合临床进行分析,必要时可使用耻骨上膀?#29366;?#21050;或导尿法留取尿液进行复检。(5)留置导尿管收集尿液:利用留置导尿管采集标本时,应先消?#38236;?#23615;管外部,按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液,操作时应防止混入消毒剂,注意不能从尿液收集袋中采集尿液。

    3.    采集容器:(l)应由不与尿液成分发生反应的惰性材料制成;(2)洁净、无菌、加盖、封闭、防渗漏;(3)不含防腐剂和?#24535;?#21058;;(4)广口、具有较宽的底部、容积应>50ml、盒盖易于开启。

    4.    标本运送:标本采集后应及时送检、及时接种,室温下保存时间不得超过2h(夏季保存时间应?#23454;?#32553;短或冷藏保存),4℃ 冷藏保存时间不得超过8h,但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。

    标本验收
    1.申请单验收:要求尿培养申请单除患者的基本信息以外还应包括标本收集时间、收集方式、是否已使用抗生素等,验收时应检查申请单
    是否填写完整。

    2.标本验收:(1)检查标本标识是否与申请单相符;(2) 检查标本容器有无溢漏、渗出,是否加盖;(3)检查送检时间是否超过规定的标本保存时间。

    3.不合格标本处理:(1)对申请单信息不全者应设法与临床医师取得联系;(2)对标识不符、送检容器不合格,送检时间超过规定时间的标本应注明原因,退回,要求重新留取标本,并做记录。

    二、实验室检查

    1.?#31185;?#26816;查:尿路感染标本可直接做细菌培养,无需常规进行?#31185;?#26816;查。?#26434;?#20020;床怀疑淋病奈瑟菌、假丝酵母菌或结核分枝?#21496;?#24863;?#38236;?#26631;本可用无菌吸管吸取尿液5-10ml置无菌试管中,3000-4000r/min离心30min,倾去上清液,取沉渣?#31185;?#34892;革兰染色或抗酸染色后镜检。

    2.细菌培养:
    (1)普通培养:将收集标本的容器轻轻旋转混匀,用定量接种环分别取尿液lul涂抹接种血平板和麦康凯平板(或中国蓝平板),35~37℃培养18-24h,观察结果。对导尿、耻骨上膀?#29366;?#21050;和已使用抗生素治疗的患者标本应增加一个10ul接种量。
    (2)特殊培养:对怀疑有苛养菌感染者应采用耻骨上膀?#29366;?#21050;或导尿法采集样本,加种一块巧克力平板,置5%CO2环境中培养48h。检查淋病奈瑟菌、结核分枝?#21496;?#24863;染时无需做定量培养,?#23665;?#26631;本离心后取尿沉渣进行培养,以提高阳?#26376;省?BR>(3)普通培养18-24h无细菌生长时,应将所有培养基继续培养24h。

                                                          表1               尿路感?#38236;?#21407;因及常见病原菌
    ————————————————————————————————————————————————————————————
    感染原因     主要致病菌                                                       感染特点
    ————————————————————————————————————————————————————————————
    上行感染     大肠埃细菌、克雷伯菌、变形?#21496;?#28107;病奈瑟菌       主要为肠道菌群或会阴部细菌逆行感染,多见于女性,多为单一细菌
                                                                                           感染,?#28304;?#32928;埃希菌感染最常见。

    泌尿系统解?#24335;?#26500;   大肠埃细菌、克雷伯菌、变形?#21496;?#26222;罗威登菌、沙雷菌、?#27426;司?#20551;单胞菌、葡?#20122;?#33740;、肠球菌
    和生理功能改变引起的感染                                                   多见于留置导尿管、肾盂造瘘术、尿路结石、尿?#20998;?#24314;、前列腺肥大、  
                                                                                           膀胱排空能力受损的患者,容易发生多种微生物的混合感染,易被误认为标本污染。


    血行感染    葡?#20122;?#33740;、结核分枝?#21496;?#27801;门菌                         发生于菌血症的患者,血液中的细菌通过血流进入肾脏引起感染,比较少见。

    直接感染   大肠埃细菌、葡?#20122;?#33740;、链球菌、肠?#21496;?nbsp;                外伤或肾周围器官发生感染时,细菌直接侵入肾脏引起感染,非常少见。
    ————————————————————————————————————————————————————————————




    表2 不同方法采集的尿标本培养结果评价
    ————————————————————————————————————————————————————————————
    标本来源         菌落数CFU/ml                        结果评价
    ————————————————————————————————————————————————————————————
    清洁中段尿         <5×10^4                        无意义,仅报告菌落数及革兰染色特征,并注明是纯培养或是混合菌生长。

                           (5-10)×10^4                 纯培养有意义,报告菌落计数和细菌鉴定、药敏试验结果;混合菌生长无意义,仅做革兰染色镜检,并报告镜检结果。

                              >10^5                          纯培养或混合菌生长,其中某?#24535;?#33853;数≥105者有意义,需进行细菌鉴定和药敏试验;4种及以上细菌生长无意义,报告标本污染。

    导尿                  >10^3                            3种以内细菌生长都有意义,对2种主要生长菌需进行细菌鉴定和药敏试验;4种及以上细菌生长无意义,报告标本污染。

    耻骨上膀?#29366;?#21050;   任意数目                           都有意义,所有细菌均需做细菌鉴定和药敏试验。
    ————————————————————————————————————————————————————————————

    四、结果观察和报告

    1. 结果观察和评价:(l)菌落计数:计数平板上的菌落数,采用1ul接种量者,将菌落数乘以103;采用10ul接种量者,将平板菌落数乘以102,即为每ml尿液中所含有的细菌数(CFU/ml)。如菌落生长过多无法精确计数时,则报告>10^5CFU /ml。(2)结果评价:正常情况下?#30001;?#33039;排泌至膀胱的尿液是无菌的,但膀胱中的尿液经尿道排出体外时可受到下尿道中正常菌群的污染,而出现细菌。因此对不同方法获取的尿液标本培养结果需正确评价,才能?#34892;?#25351;导临床合理治疗。一般认为,清洁中段尿标本中单种细菌菌落数>10^5 CFU/ml可能为感染;<5×10^4CFU/ml可能为污染,在两者之间需要根据具体情况进行评估。

    2.阴性培养结果报告:培养48h无菌落生长,即为阴性。接种lul尿量者,应报告“培养48h,菌落计数<10^3CFU/ ml”;接种10ul尿量者,应报告“培养48h,菌落计数<10^2CFU/ml”。

    3. 阳性培养结果报告:无意义的阳性培养结果报告;纯培养报告“革兰×性×菌生长,菌落计数:××CFU/ml”;混合菌生长报告“革兰×性×菌和革兰×性×菌混合生长”。有意义的阳性培养结果报告:报告菌落计数、细菌?#36136;?#21517;称及标准抗菌药物敏?#34892;?#35797;验结果。



    附录
    1. 关于尿培养标本的接种:由于自然排尿收集的标本很难避免会阴部及下尿道细菌污染,所以需要定量接种、合理评价才能判断培养的细菌是否与尿路感染有关。定量接种的方法有直接划线法和倾注平板法两种,后者由于操作步骤繁琐,已几乎不被临床实验室使用。直接划线接种法的关键是应保证接种量的准确性,可使用1ul或10ul的定量接种环,方法是将接种环校准后,?#28304;?#30452;方向持拿,使环圈刚好浸人尿液表面(不可使尿液碰到环上方的环柄),取尿液进行接种。无定量接种环的实验室,可使用无菌的5ul微量移液器吸取尿液加人平板,再用接种环划线接种,将平板菌落数乘以200,即为每ml尿液中所含有的细菌数(CFU /ml)。

    2.关于尿培养检验培养基的选择?#22909;?#26377;一种平板可以适合所有尿道病原体的生长,所?#26434;?#35813;根据标本来源及临床对目标菌的要求选择适合的培养基和培养条件。普通培养推荐使用血平板和麦康凯(或中国蓝)平板,不能以血平板代替麦康凯或中国蓝平板。
    3. 关于尿培养结果评价:菌落计数>10^5CFU/ml时只是判诊断尿路感?#38236;?#19968;般标准。对一个实验室而言,如果仅使用一个标准对实验结果进行解释,那么若标准制定过松,将会造成抗生素滥用和不必要的资源浪费;制定过?#24076;?#23558;有可能导致尿路感?#38236;?#28431;诊。所以每个实验室应在与临床医师密切合作的基础上,根据不同的情况制定不同的解释标准。尿培养菌落计数可受多种因素的影响,在一些患者?#35789;?#33740;落数较少,也有明显的临床意义,所以对菌落数<5×10^4CFU/ml,“规范”中认为无意义的阳性结果,不应随意丢弃,必要时应很据患者的具体情况或与临床医师联系后,决定是否需要做细菌鉴定和药敏试验。以下因素可使尿液中细菌数量减少,判断结果时应予以注意:(l)使用抗生素治疗,细菌生长受到?#31181;疲?2)尿液稀释,尿比重<1.003,营养成分减少,细菌生长迟缓;(3)尿pH <5.0或>8.5,细菌生长受阻;(4)尿频时,膀胱内细菌停留时间短,菌落数减少;(5)尿道口消毒液混入标本中,影响细菌繁?#24120;?#33740;落数减少;(6)不同种类的细、生长速度不同、营养要求不同,菌落计数有所不同,有文献推荐:革兰阴性菌以菌落计数>10^5CFU/ml,而革兰阳性菌以菌落计数>10^4CFU/ml为诊断尿路感?#38236;?#26631;准。

    4. 尿培养检验中常见的错误:(l)将尿液标本接种于增菌液中;(2)将中段尿标本离心后取沉渣进行一般细菌培养;(3)标本保存时间超时,细菌大量繁?#24120;?4)直接用导尿管头划线培养;(5)使用中段尿标本做厌氧菌培养。

    《临床微生物学检验操作规范》 编写组成员


    (来源: 来宝网 )


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