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    现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>质粒提取纯化> 质粒小量提取试剂盒 II(50preps)

    商品编号:53828
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    质粒小量提取试剂盒 II(50preps)

    价    格:420.00

    产    地:美国更新时间:2016/12/19 11:00:40

    品    牌:Biomiga型    号:PD1213-01

    状    态:正常点击量:892

    15068328216
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    上海妙骏生物科技有限公司

    联 系 人:言国英

    电     话:021-54461558

    传     真:021-54461657

    等     级: (第 10年)

    性     质:生产型,

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    试剂盒组分:

    Catalog#
    PD1213-01
    Preps
    50
    ezBind Columns
    50
    Buffer A1
    25 mL
    Buffer B1
    25 mL
    Buffer N1
    30 mL
    Buffer KB
    30 mL
    DNA Wash Buffer*
    15 mL
    Elution Buffer
    15 mL
    RNase A (20 mg/mL)
    2.5 mg
    (125 μL)
    User Manual
    1
    ?
    保存条件:
    ?
    RNAse A在4℃下可?#21592;?#23384;一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组?#36136;?#28201;保存。
    ?
    注意事项:
    1. 使用前请将适量乙?#25216;?#20837;DNA Wash Buffer,令乙醇终浓度为80%
    2. 纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer
    3. 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进?#20449;?#20859;。
    4. 若用于提取1-4 mL的菌落,请将Buffer A1, B1, N1的量降低至250 μL, 250 μL 及 350 μL,DNA wash Buffer及Elution Buffer的量不变。
    操作步骤:
    1. 接?#20013;?#40092;的单个菌落到5-12 mL的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时(勿超过16小时)。室温下10,000 rpm离心1分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
    2. 加入450 μL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
    3. 加入 450 μL Buffer B1, 轻轻地反转多次至溶液充分混匀,室温静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。?
    4. 加入550 μL Buffer N1, 立即反转多次,至溶液充分混匀,此时出现?#21672;?#32110;状沉淀。
    5. 将离心管转至高速离心机,在室温下13,000 rpm离心10分钟(若上清中有?#21672;?#27785;淀,可再次离心)。
    6. 小心吸取700 μL离心后的上清液至带有收集管的DNA柱中(避免吸起沉淀),室温下13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管?#23567;?#37325;复步骤“7”至全部上清离心过DNA柱。
    7. 可选: 向DNA柱中加入 500 μL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管?#23567;?
    8. 向离心柱中加入650 μL DNA Wash Buffer(确保已加入无水乙醇),室温下,13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管?#23567;?#37325;复步骤“8”。
    9. 将离心柱放回高速离心机中,13,000 rpm室温下开盖离心2分钟,以彻底去除残留的乙醇。
    10. 将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中,向DNA柱的正中间加入100~150 μL(体积>100 μL)的ddH2O(pH在7.0-8.5之间)或Elution Buffer,室温放置2分钟,13,000 rpm 离心1分钟,洗脱质粒DNA。将洗脱液再加到柱的中间,13,000 rpm 离心1分钟,洗脱质粒DNA。

    操作流程

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