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    现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>质粒提取纯化> 快速过滤法质粒大量提取试剂盒(10preps)

    商品编号:53840
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    快速过滤法质粒大量提取试剂盒(10preps)

    价    格:910.00

    产    地:美国更新时间:2016/12/19 11:00:40

    品    牌:Biomiga型    号:PD1512-01

    状    态:正常点击量:801

    15068328216
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    上海妙骏生物科技有限公司

    联 系 人:言国英

    电     话:021-54461558

    传     真:021-54461657

    等     级: (第 10年)

    性     质:生产型,

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    试剂盒组分:
    ?
    Catalog#
    PD1512-01
    Preps
    10
    ezBindTM Columns
    10
    Filter syringe(60 mL)
    10
    Buffer A1
    110 mL
    Buffer B1
    110 mL
    Buffer C1
    135 mL
    Buffer KB
    110 mL
    RNase A(20 mg/mL)
    11 mg(550 μL)
    Elution Buffer
    30 mL
    User Manual
    1
    ?
    保存条件:
    ?
    ?RNAse A在4℃下可?#21592;?#23384;一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组?#36136;?#28201;保存。
    ?
    注意事项:
    1. 质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
    2. 转化菌:若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进?#20449;?#20859;。
    3. 柱结合能力:1 mg
    操作简明步骤:
    1. 取100 μL新鲜的菌液接种到150-200 mL (勿超过 200 mL)的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
    2. 加入10 mL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
    3. 加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 ?#25105;?#28151;合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。?
    4. 加入12 mL Buffer C1, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现?#21672;?#32110;状沉淀。
    5. 将裂解液转移至过滤器中,放在一个50 mL的试管上静置10分钟。管中的?#21672;?#32110;状沉淀浮上来,对准50 mL的管向下压,使裂解液尽可能多的通过,有些裂解液可能会残留在沉淀中。注:静置10 分钟时RNase A将工作,排除RNA污?#23613;?
    6. 加入12 mL 100% 乙醇,立即混匀,需马上离心过DNA柱。
    7. 立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中,室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重?#21019;?#27493;直至所有的溶?#21644;?#36807;DNA柱。
    8. 可选: 向DNA柱中加入 10 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。
    9. 向离心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室温下>2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
    10. 将离心柱放回高速离心机中,室温下>2,500 x g 开盖离心10分钟,以彻底去除残留的乙醇。
    11. 将离心柱转至一个新的50 mL离心管中,向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL灭菌ddH2O(pH在7.0-8.5之间)或Elution Buffer,室温放置1分钟,5,000 x g离心5分钟,以洗脱质粒DNA。若想提高得率,将50 mL离心管中的洗脱液再加到柱的中间,5,000 x g离心5分钟以洗脱质粒DNA。

    操作流程:





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