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    现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>质粒提取纯化> 无内毒素小量质粒提取试剂盒I(50preps)

    商品编号:53854
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    无内毒素小量质粒提取试剂盒I(50preps)

    价    格:406.00

    产    地:美国更新时间:2016/12/19 11:00:40

    品    牌:Biomiga型    号:PD1212-01

    状    态:正常点击量:921

    15068328216
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    上海妙骏生物科技有限公司

    联 系 人:言国英

    电     话:021-54461558

    传     真:021-54461657

    等     级: (第 10年)

    性     质:生产型,

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    试剂盒组分:
    ?
    Catalog #
    PD1212-01
    Preps
    50
    ezBind Columns
    50
    Buffer A1
    25 mL
    Buffer B1
    25 mL
    Buffer N3
    30 mL
    Buffer KB
    30 mL
    DNA Wash Buffer*
    15 mL
    EndoClean Buffer
    10 mL
    Endofree Eluiton Buffer
    10 mL
    RNase A(20 mg/mL)
    2.5 mg(125μL)
    User Manual
    1
    ?
    保存条件:
    ?
    RNAse A在4℃下可?#21592;?#23384;一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组?#36136;?#28201;保存。
    ?
    注意事项:
    1. 质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,N3,相同体积的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer .
    2. 转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进?#20449;?#20859;。
    3. 切勿直接取冻存的菌种进?#20449;?#20859;。
    操作简明步骤:
    1. 接?#20013;?#40092;的单个菌落到3-12 mL的LB培养基 (含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。
    2. 室温下10,000 x g离心1分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
    3. 加入450 μL Buffer A1 (确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保菌体充分悬浮。
    4. 加入 450 μL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 ?#25105;?#28151;合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。?
    5. 加入100 μL Buffer N3, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现?#21672;?#32110;状沉淀。
    6. 将离心管转至高速离心机,在室温下13,000 rpm离心10分钟(若上清中仍有?#21672;?#27785;淀,可翻转后再次离心5分钟)
    7. 定量吸取离心后的上清液至新的1.5mL管中,加入0.1 volume的EndoClean Buffer,混匀后冰浴10分钟,其间不时摇匀(EndoClean Buffer粘稠难吸,可将枪头剪掉头后再吸取)
    8. 室温下(冰浴取出后务必使溶液温?#28982;?#22797;到23oC以上,否则溶液不分层,为保证分层效果,可直接在65oC温育5分钟)13,000 rpm离心10分钟。此时溶液分为两层,上层水相含有质粒,下层红色有机相含有无内毒素。
    9. 将上层水相转移至一个新的2.0 mL管中,加入450 μL的Buffer N3及400 μL的100% ethonal,用手用力甩3?#25105;?#28151;?#21462;?
    10. 将溶液700 μL转移至带有收集管的DNA柱中,室温下13,000 rpm 离心20秒,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管?#23567;?#37325;?#21019;?#27493;骤至全部溶液转移至DNA柱?#23567;?
    11. 可选: 向DNA柱中加入 500 μL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管?#23567;?
    12. 向离心柱中加入650 μL DNA Wash Buffer (确保已加入无水乙醇)室温下,13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管?#23567;?#37325;复步骤“12”。
    13. 将离心柱放回高速离心机中,13,000 rpm室温下开盖离心2分钟,以彻底去除残留的乙醇。
    14. 将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中,向DNA柱的正中间加入50~100 μL (体积>50 μL) 的Endofree Elution Buffer,洗脱质粒DNA。将离心管中的洗脱液再次加到DNA柱的正中间,室温放置1分钟,13,000 rpm 离心1分钟,收集洗脱液到同一个离心管?#23567;?/strong>

    操作流程:





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