• <div id="y09gn"></div>
  • <li id="y09gn"></li>
    <dl id="y09gn"></dl>
    <div id="y09gn"><s id="y09gn"></s></div>
    来宝网Logo

    热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

    现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>质粒提取纯化> 无内毒素质粒中量提取试剂盒(10preps)

    商品编号:53856
    分享

    无内毒素质粒中量提取试剂盒(10preps)

    价    格:553.00

    产    地:美国更新时间:2016/12/19 11:00:40

    品    牌:Biomiga型    号:PD1415-01

    状    态:正常点击量:708

    15068328216
    联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!

    上海妙骏生物科技有限公司

    联 系 人:言国英

    电     话:021-54461558

    传     真:021-54461657

    等     级: (第 10年)

    性     质:生产型,

    联系我时请说在来宝网上看到的,谢谢!




    试剂盒组分:
    ?
    Catalog #
    PD1415-01
    Preps
    10
    EzBindTM Columns
    10
    Buffer A1
    30 mL
    Buffer B1
    30 mL
    Buffer N3
    40 mL
    Buffer KB
    35 mL
    EndoClean? Buffer
    10 mL
    RNase A (20 mg/mL)
    3 mg(150 μL)
    Endofree Eluiton Buffer
    15 mL
    User Manual
    1
    ?
    保存条件:
    ?
    RNAse A在4℃下可?#21592;?#23384;一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组?#36136;?#28201;保存。
    ?
    注意事项:
    1. 质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,N3,100%乙醇,相同体积的70% 乙醇和Endofree Elution Buffer.
    2. 转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进?#20449;?#20859;。
    3. 切勿直接取冻存在4oC的菌进?#20449;?#20859;。
    4. 柱结合能力:250 μg
    5. 对富含内源核酸酶的宿主菌(endA+)如HB101, JM101, TG1等,需去核酸酶,请使用产品PD1712。
    操作简明步骤:
    1. 取50 μL新鲜的菌液接种到15-50 mL (勿超过 50 mL)的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
    2. 加入2.5 mL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
    3. 加入 2.5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 ?#25105;?#28151;合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。?
    4. 加入600 μL Buffer N3, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现?#21672;?#32110;状沉淀。
    5. 将离心管转至高速离心机,在室温下13,000 x g 离心10分钟(若上清中有?#21672;?#27785;淀,可再次离心)。
    6. 定量吸取离心后的上清液至新的15 mL管中(避免吸起沉淀),加入0.1 倍体积的EndoClean Buffer,混匀后冰浴10分钟,其间不时摇匀(若EndoClean Buffer粘稠难吸,可将枪头剪掉头后再吸取)。
    7. 室温下(冰浴取出后务必使溶液温?#28982;?#22797;到23oC以上,否则溶液不分层)13,000 x g离心10分钟(?#37096;?#22312;2,500 x g离心15 分钟)。此时溶液分为两层,上层水相含有质粒,下层红色有机相含有内毒素。
    8. 将上层水相转移至一个新的15 mL管中,加入3 mL的Buffer N3及3 mL的100% ethonal,用手用力甩5?#25105;?#28151;匀,该混?#20808;芤盒?#35201;需马上进行过柱吸附操作。
    9. 立即转移6.0 mL裂解液至带收集管的DNA柱中,室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重?#21019;?#27493;直至所有的溶?#21644;?#36807;DNA柱。
    10. 可选: 向DNA柱中加入 3.0 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。
    11. 向离心柱中加入5 mL 70% 乙醇,室温下> 2,500 x g离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“11”。
    12. 将离心柱放回高速离心机中,室温下> 2,500 x g开盖离心10分钟,以彻底去除残留的乙醇。
    13. 将离心柱转至一个新的15 mL离心管中,向DNA柱膜的正中加入0.5 mL的Endofree Elution Buffer,室温放置1分钟,> 2,500 x g 离心5分钟,以洗脱质粒DNA。若想提高得率,可用洗脱得到的0.5 mL的Endofree Elution Buffer再洗脱一次,收集到新的离心管中。




    猜你喜欢
    云南11选5技巧
  • <div id="y09gn"></div>
  • <li id="y09gn"></li>
    <dl id="y09gn"></dl>
    <div id="y09gn"><s id="y09gn"></s></div>
  • <div id="y09gn"></div>
  • <li id="y09gn"></li>
    <dl id="y09gn"></dl>
    <div id="y09gn"><s id="y09gn"></s></div>