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    现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>质粒提取纯化> 快速过滤法无内毒素质粒中量提取试剂盒(25preps)

    商品编号:53860
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    快速过滤法无内毒素质粒中量提取试剂盒(25preps)

    价    格:1390.00

    产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

    品    牌:Biomiga型    号:PD1416-02

    状    态:正常点击量:725

    15068328216
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    上海妙骏生物科技有限公司

    联 系 人:言国英

    电     话:021-54461558

    传     真:021-54461657

    等     级: (第 10年)

    性     质:生产型,

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    试剂盒组分:
    ?
    Catalog #
    PD1416-02
    Preps
    25
    EzBindTM Columns
    25
    Filter syringe (25 mL)
    25
    Buffer A1
    70 mL
    Buffer B1
    70 mL
    Buffer N3
    100 mL
    Buffer KB
    85 mL
    EndoClean? Buffer
    25 mL
    RNase A (20 mg/mL)
    7 mg(350 μL)
    Endofree Elution Buffer
    50 mL
    User Manual
    1
    ?
    保存条件:
    ?
    RNAse A在4℃下可?#21592;?#23384;一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组?#36136;?#28201;保存。
    ?
    注意事项:
    1. 质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,N3,100%乙醇,相同体积的70% 乙醇和Endofree Elution Buffer..
    2. 转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进?#20449;?#20859;。切勿直接取冻存在4oC的菌进?#20449;?#20859;。
    3. 柱结合能力:250 μg。
    4. 对富含内源核酸酶的宿主菌(endA+)如HB101, JM101, TG1等,需去核酸酶,请使用产品PD1712。
    操作简明步骤:
    1. 取50 μL新鲜的菌液接种到15-50 mL (勿超过 50 mL)的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
    2. 加入2.5 mL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
    3. 加入 2.5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 ?#25105;?#28151;合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。?
    4. 加入600 μL Buffer N3, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现?#21672;?#32110;状沉淀。
    5. 将裂解液转移至过滤器中,放在一个15 mL的试管上静置10分钟。管中的?#21672;?#32110;状沉淀浮上来,对准15 mL的管向下压,使裂解液尽可能多的通过,有些裂解液可能会残留在沉淀中。注:静置10 分钟时RNase A将工作,排除RNA污?#23613;?
    6. 定量吸取离心后的上清液至新的15 mL管中(避免吸起沉淀),加入0.1 倍体积的EndoClean Buffer,混匀后冰浴10分钟,其间不时摇匀(若EndoClean Buffer粘稠难吸,可将枪头剪掉头后再吸取)。
    7. 室温下(冰浴取出后务必使溶液温?#28982;?#22797;到23oC以上,否则溶液不分层)13,000 x g离心10分钟(?#37096;?#22312;2,500 x g离心15 min)。此时溶液分为两层,上层水相含有质粒,下层红色有机相含有内毒素。
    8. 将上层水相转移至一个新的15 mL管中,加入3 mL 的Buffer N3及3 mL的100% ethonal,用手用力甩5?#25105;?#28151;匀,该混?#20808;芤盒?#35201;需马上进行过柱吸附操作。
    9. 立即转移6.0 mL裂解液至带收集管的DNA柱中,室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重?#21019;?#27493;直至所有的溶?#21644;?#36807;DNA柱。
    10. 可选: 向DNA柱中加入 3.0 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。
    11. 向离心柱中加入5 mL 70% 乙醇,室温下> 2,500 x g离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“11”。
    12. 将离心柱放回高速离心机中,室温下> 2,500 x g开盖离心10分钟,以彻底去除残留的乙醇。
    13. 将离心柱转至一个新的15 mL离心管中,向DNA柱膜的正中加入0.5 mL的Endofree Elution Buffer,室温放置1分钟,> 2,500 x g 离心5分钟,以洗脱质粒DNA。若想提高得率,可用洗脱得到的0.5 mL的Endofree Elution Buffer。 再洗脱一次,收集到新的离心管中。




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