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    现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>质粒提取纯化> EndoFree plasmid ezFlow mini kit II (50preps)

    商品编号:53875
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    EndoFree plasmid ezFlow mini kit II (50preps)

    价    格:576.00

    产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

    品    牌:Biomiga型    号:PD1222-01

    状    态:正常点击量:784

    15068328216
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    上海妙骏生物科技有限公司

    联 系 人:言国英

    电     话:021-54461558

    传     真:021-54461657

    等     级: (第 10年)

    性     质:生产型,

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    试剂盒组分:
    ?
    Catalog #
    PD1222-01
    Preps
    50
    ezBind Columns
    50
    Buffer A1
    25 mL
    Buffer B1
    25 mL
    Buffer N3
    5 mL
    Buffer KB
    30 mL
    Buffer RET
    50 mL
    DNA Wash Buffer*
    15 mL
    Endofree Elution Buffer
    10 mL
    RNase A(20 mg/mL)
    2.5 mg(175 μL)
    User Manual
    1
    ?
    保存条件:
    ?
    RNAse A在4℃下可?#21592;?#23384;一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组分室温保存。
    ?
    注意事项:
    1. 质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同体积的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.
    2. 转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进?#20449;?#20859;。
    3. 切勿直接取冻存的菌进?#20449;?#20859;。
    操作简明步骤:
    1. 接?#20013;?#40092;的单个菌落到3-12 mL的LB培养基 (含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。
    2. 室温下13,000? rpm 离心1分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
    3. 加入450 μL Buffer A1 (确保已加入RNase A) ,用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
    4. 加入 450 μL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 ?#25105;?#28151;合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。?
    5. 加入预冷的80 μL Buffer N3(或加入到裂解液后在冰上放置1分钟将有利于减少蛋白漂浮), 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现?#21672;?#32110;状沉淀。
    6. 将离心管转至高速离心机,在室温下13,000 rpm离心10分钟(若上清中仍有?#21672;?#27785;淀,可再次离心)。
    7. 定量吸取离心后的上清液至新的1.5 mL管中,加入1倍体积的Buffer RET, (如900 μL裂解液加入到900 μL的上清液)及400 μL的100% ethonal,充分颠倒混?#21462;?
    8. 将溶液700 μL转移至带有收集管的DNA柱中,室温下13,000 rpm 离心20秒,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重?#21019;?#27493;骤至全部溶液转移至DNA柱中。
    9. 可选: 向DNA柱中加入 500 μL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。
    10. 向离心柱中加入500 μL DNA Wash Buffer(确保已加入无水乙醇),室温下,13,000 rpm 离心20秒,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“10”。
    11. 将离心柱放回高速离心机中,13,000 rpm室温下开盖离心2分钟,以彻底去除残留的乙醇。
    12. 将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中,向DNA柱的正中间加入50~100 μL(体积>50 μL)的Endofree Elution Buffer,室温放置1分钟,13,000 rpm 离心1分钟,洗脱质粒DNA。将离心管中的洗脱液再次加到DNA柱的正中间,室温放置1分钟,13,000 rpm 离心1分钟,收集洗脱液到同一个离心管中。

    操作流程:





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