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    热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

    现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>质粒提取纯化> 无内毒素快速质粒大量提取试剂盒(25preps)

    商品编号:53883
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    无内毒素快速质粒大量提取试剂盒(25preps)

    价    格:2310.00

    产    地:美国更新时间:2016/12/19 11:00:40

    品    牌:Biomiga型    号:PD1520-02

    状    态:正常点击量:861

    15068328216
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    上海妙骏生物科技有限公司

    联 系 人:言国英

    电     话:021-54461558

    传     真:021-54461657

    等     级: (第 10年)

    性     质:生产型,

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    产品组成

    Catalog #

    PD1520-00

    PD1520-01

    PD1520-02

    Preps

    2

    10

    25

    ezBindTM Columns

    2

    10

    25

    Buffer A1

    22 mL

    110 mL

    270 mL

    Buffer B1

    22 mL

    110 mL

    270 mL

    Buffer N3

    8 mL

    40 mL

    85 mL

    Buffer KB

    22 mL

    110 mL

    270 mL

    Buffer RET

    22 mL

    110 mL

    270 mL

    RNase A(20 mg/mL)

    2.2 mg

    (110 μL)

    11 mg

    (550 μL)

    27 mg

    (1.35 mL)

    Endofree Elution Buffer

    5 mL

    25 mL

    60 mL

    User Manual

    1

    1

    1

    注意事项:

    1.?????? 质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同体积的DNA Wash BufferEndofree Elution Buffer.

    2.?????? 转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进?#20449;?#20859;。

    3.?????? 切勿直接取冻存的菌进?#20449;?#20859;。

    操作简要步骤:

    1.?? 100 μL新鲜的菌液接种150-200 mL (勿超过 200 mL)LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。

    2.?? 加入10 mL Buffer A1确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。

    3.?? 加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 ?#25105;?#28151;合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。?

    4.?? 加入3 mL Buffer N3, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现?#21672;?#32110;状沉淀。

    5.?? 将离心管转至高速离心机,在室温下12,000 x g离心10分钟(若上清中有?#21672;?#27785;淀,可再次离心)

    6.?? 转移上清液20 mL(不超过20 mL)至新的50mL离心管中,加入0.5倍体积的Buffer RET (即每20 mL裂解液加入10 mL Buffer RET) 10 mL100% ethonal,用手用力甩5?#25105;?#28151;匀,需马上离心过DNA柱。

    7.?? 立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中,室温下> 2,500 x g离心2分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。将剩余溶液转移至DNA柱中,室温下> 2,500 x g离心2分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重复直至所有的溶?#21644;?#36807;DNA柱。

    8.?? 可选:向离心柱中加入10 mL Buffer KB,室温下> 2,500 x g离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。

    9.?? 向离心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室温下> 2,500 x g离心1分钟,倒掉收集管中的废?#28023;?#23558;离心柱重新放回到收集管中。重复步骤9”

    10.????? 将离心柱放回高速离心机中,室温下5,000 x g开盖离心10分钟,以彻底去除残留的乙醇。

    11.????? 将离心柱转至一个新的50 mL离心管中,向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL Endofree Elution Buffer,室温放置1分钟,> 2,500 x g离心5分钟,以洗脱质粒DNA。50 mL离心管中的洗脱液上柱再放置洗脱1分钟,> 2,500 x g离心5分钟。 两次洗脱将提高得率。





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