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    热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

    现在位置首页>实验试剂制品>蛋白纯化>蛋白提取> 韩国iNtRON 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

    商品编号:49659
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    韩国iNtRON 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

    价    格:询价

    产    地:韩国更新时间:2019/7/15 13:41:34

    品    牌:iNtRON型    号:

    状    态:正常点击量:2107

    18253171090
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    济南安环医疗器械有限公司

    联 系 人:李经理

    电     话:18253171090

    传     真:

    等     级: (第 5年)

    性     质:生产型,

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    一、描述
    本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞质蛋白,提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天?#25442;?#24615;,并且纯度?#32454;摺?#25552;取的蛋白可用于进一步的转?#23478;?#23376;活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。
    ?
    二、试剂盒组份

    组份
    CY10022a(50 test)
    CY10022a (100 test)
    Buffer A
    ?25 mL
    25 mL ×2
    Buffer B
    ?1.5 mL
    3.0 mL
    Buffer C
    12.5 mL
    25 mL
    DTT
    50μL
    100μL
    蛋白酶抑制剂
    250μL
    500μL
    PMSF(MW:170.3)
    1.0mg
    2.0mg
    异丙醇
    800μL
    1.5mL

    ?
    三、操作步骤
    1、?? 取培养细胞5×106~1×107个/mL,弃去培养液,细胞用预冷的PBS洗涤两遍;
    2、?? 用1mL预冷的PBS刮下细胞转移至预冷的1.5mL 微量离心管中;
    3、?? 4℃离心,500×g,3 min收集细胞,用移液枪尽可能取去上清,勿留残液,估计细胞压积PCV(离心后的紧实细胞体积); 【如果是组织样本,将组织剪切成小块,加入适量的冰冷PBS均浆后,静置5 min ,小心吸取上清转移至另一离心管中,弃沉淀,上清4℃离心500×g,3 min,弃上清,估计细胞压积】。
    4、?? 每20μL细胞压积中,加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT,5μL PMSF(用户自配?#21495;?#24230;100mM,溶于异丙醇),5μL蛋白酶抑制剂】,最大转速涡旋剧烈振荡15s,放置冰上10~15min;
    5、?? 加入11μL冷Buffer B,最大转速涡旋剧烈振荡5s,放置冰上1min;
    6、?? 再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后, 4℃离心,16000×g,5min;
    7、?? 尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管,置于冰上,即得胞质蛋白;
    8、?? 在离心沉淀物(细胞核)中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT,5μLPMSF,5μL蛋白酶抑制剂),最大转速涡旋剧烈振荡15s,放置冰上40min,每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds;
    9、?? 4℃离心,16000×g,,10min,尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管,即得核蛋白;
    10、上述提取的胞质蛋白和核蛋白进行蛋白定量(Braford法或BCA法),分?#23433;?#20445;存于-80℃,避免反复冻融。
    ?
    四、备注?
    1、? 所?#26800;?#35797;剂及器具均需预冷后使用;
    2、? 细胞的数量不应少于2~5×107个/mL;,
    ??? 3、? 以上各缓冲液的使用量是以20μL细胞压积为例,如细胞压积不同,请参考下表加入各缓冲液。

    细胞压积PCV
    Buffer A
    Buffer B
    Buffer C
    10μL
    100μL
    5.5μL
    50μL
    20μL
    200μL
    11μL
    100μL
    50μL
    500μL
    27.5μL
    250μL
    100μL
    1mL
    55μL
    500μL

    ??? 4、? ?#35805;?#24120;规提取的蛋白样品,进行后续试验不需要透析,但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想,则需要将提取的蛋白样品进?#22411;?#26512;脱盐,建议使用凯基透析Buffer (Cat: KGB—P001)透析后进行后续分析。

    五、储存?-200C,保存一年。





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