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    热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

    商品编号:73632
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    abs9117 SDS Lysis Buffer

    价    格:360

    产    地:上海更新时间:

    品    牌:absin型    号:abs9117

    状    态:正常点击量:25

    17621920087
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    爱必信(上海)生物科技有限公司

    联 系 人:爱必信

    电     话:021-38015121/28

    传     真:021-38015121-8826

    等     级: (第 9年)

    性     质:生产型,服务型,

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    产品参数

    保存方法-20℃
    技术指标A组分:SDS Lysis Buffer(100ml)

    B组分:PMSF(100mM) (1.0ml)



    产品介绍

    描述

    SDS,也称十二烷基硫酸钠(Sodium Dodecyl Sulfate),是一种常见的阴离子去垢剂,常用于变性蛋白。SDS 裂解?#28023;⊿DS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解?#28023;?#20027;要成分为50mM Tris-HCl(pH 8.1),1% SDS 以及焦磷酸钠,甘油磷酸钠、正钒酸钠,氟化钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,经本品裂解所得的蛋白样品,适用于常规的蛋白免疫印迹(Western Blot),染色质免疫共沉淀(ChIP)等实验。?

    别名SDS裂解液
    使用方法
    1、培养的细胞样品

    (1)充分融解 SDS 裂解?#28023;?#20043;后混匀。取?#23454;?#37327;的裂解?#28023;?#20351;用前数分钟内加入 PMSF(100mM),使其最终浓度为 1mM。

    (2)贴壁细胞:吸除培养?#28023;?#29992; PBS、生理盐水或无血清培养?#21512;?#19968;遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可忽略此步)。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250μl 裂解液的比例加量。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-3 秒后,细胞就会被裂解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP,应置于冰上或 4℃裂解 15-30min。

    (3)悬浮细胞:离心收集细胞,用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP,应置于冰上或 4℃裂解 15-30min。

    (4)充分裂解后,10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和 ChIP 等操作。

    【裂解液用量说明】?#21644;?#24120; 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够,如果细胞密度非常高可以?#23454;?#21152;大裂解液的用量到 200μl 或 250μl。如果用于 ChIP,建议 6 孔板每孔细胞至少加入 200μl 裂解液。


    2、组织样品

    (1)将组织剪切?#19978;?#23567;的碎片。

    (2)充分融解 SDS 裂解?#28023;?#20043;后混匀。取?#23454;?#37327;的裂解?#28023;?#20351;用前数分钟内加入 PMSF(100mM),使其最终浓度为 1mM。

    (3)按照每 20mg 组织加入 150-250μl 裂解液的比例加量。【注意:如果裂解不充分可以?#23454;?#28155;加用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可?#23454;?#38477;低用量。】

    (4)用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解,此过程尽量控制在 1-2 分钟内,以减少蛋白的降解。如果提取的蛋白样品用于 ChIP,应置于冰上或 4℃继续裂解 10-20min。

    (5)充分裂解后,10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和 ChIP 等实验。

    (6)如果组织样品本身非常细小,可以?#23454;?#21098;切后直接加入裂解液裂解,通过高强度的?#37995;谢?#21248;器使样品裂解充分,之后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。




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