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    商品编号:55402
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    Fast EvaGreen qPCR Master Mix 一种既适用于快速循环 qPCR 又适用于高分辨率熔解曲线( HRM )分析的 PCR 试剂盒

    价    格:询价

    产    地:美国更?#29575;?#38388;:2016/12/19 11:00:40

    品    牌:Biotium型    号:

    状    态:正常点击量:5235

    18253171090
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    济南佰源医疗设备有限公司

    联 系 人:李经理

    电     话:18253171090

    传     真:

    等     级: (第 2年)

    性     质:生产型,

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    Fast EvaGreen qPCR Master Mix 是一种既适用于快速循环 qPCR 又适用于高分辨率熔解曲线( HRM )分析的 PCR 试剂盒。该试剂体?#30340;?#25324;了 PCR 领域的两项突破性技术: EvaGreen qPCR 染料和 Cheetah Taq hotstart DNA 聚合酶。因此,与其他商业化的 master mix 产品相比, Fast EvaGreen qPCR Master Mix 可以为客户带来更为精确的实验结果。

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    图 1. 比较 Biotium 公司 Fast EvaGreen Master Mix 产品和市场上其他两家主流公司( A:ABI 公司和 Q:Qiagen公司)生产的 SYBR Green master mix 产品在扩增人类基因组 DNA 的 ATPG 片断( 104 个核苷酸的片断,编码 ATP 基因)方面的效果。实验在同一块 PCR 板上进行,使用 ABI 7900 Fast 实时 PCR 仪, DNA 的上样量为分别为 200 ng , 20 ng , 2 ng , 200 pg , 20 pg 和 0 pg 。以不结合 DNA 的 ROX 染料作为参照计算最终的 ΔRn 值,从而真实地?#20174;?#27599;种产品的荧光值变化。由于 Q 公司的 master mix 激活相对较慢,整块 PCR 板的激活条件都是 95°C 下 5 ?#31181;印?PCR 循环为两步: 96 °C (5 s) 之后 60°C (30 s) 。 DNA 上样量为 200 ng 的扩增曲线被突出显示,以和其余上样量的结果相区别。左上方的小图显示的是放大以后基线附近的扩增情况,由于两种 基于 SYBR 的快速 master mix 产品扩增信号?#23545;?#24369;于 EvaGreen Master Mix ,放大以后能更好的观察扩增曲线。

    EvaGreen Dye: EvaGreen 是 Biotium 公司的DNA 结合染料,它是一种同时适用于实时 PCR 和 高分辨率熔解曲线( HRM )分析的新一代染料。这种染料通过一种被称为“按要求释放”的全新机制,选择性的结合双链 DNA 。这一机制保证了?#31995;?#30340; PCR ?#31181;?#20316;用,同时也?#24066;?#22312;染料饱和浓度以下进行高分辨率熔解曲线( HRM )分析。由于 EvaGreen 染料在光谱特性上类似于 FAM 以及 SYBR Green I ,因此 这种染料兼容所有商业化的 qPCR 仪器。此外,和 SYBR Green I 以及 SYBR GreenER 不同的是, EvaGreen 染料非常稳定且无致突变性和细胞毒性。

    Cheetah Taq: Cheetah Taq 是Biotium公司的一种新型化学修饰的热启动 DNA 聚合酶。和 AmpliTaq Gold 不同的是, Cheetah Taq 在标?#26082;?#21551;动条件下 (例如:使用 pH 8-9 Tris 缓冲液并置于 94°C), 仅需 2 ?#31181;?#21363;可完全激活。而另一方面,与 Platinum Taq 等基于抗体技术的 热启动聚合酶相比, Cheetah Taq 在室温下完全没有活性,同时?#27493;?#20302;了内在的 DNA 污染。此外,总体来说, Cheetah Taq 在 -20°C 和 4°C 时的稳定性都优于 AmpliTaq Gold,这也保证了产品在低温保存时仍能维持自身的高?#20998;省?/p>

    由拥有以上两项技术专利的Biotium公司生产的 Fast EvaGreen Master Mix 产品已经使用各种类型的扩增模版进行过测试,包括:短片断( <100 bp ),长片断( >700bp ),?#32531;?AT 的片断,?#32531;?GC 的片断以及基因组起始区。实验结果显示, Fast EvaGreen Master Mix 扩增效率优异,结果远优于其它供应商的基于 SYBR 的 master mix 产品。由于产?#20998;?#30340;染料技术和酶技术都来源于Biotium公司,?#29575;笲iotium提供的 master mix 产品在价格上是最具竞争力的产?#20998;?#19968;。Biotium公司的 master mix 产品以高?#20998;?#21644;富有竞争力的价格,为客户提供了其他同类产品难以的价值。

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    图 2. 比较 Biotium 公司 Fast EvaGreen Master Mix 产品和市场上其他两家主流公司( Abi 公司和 Qiagen 公司)生产的 SYBR Green master mix 产品在扩增人类大脑 cDNA 的 B2M 片断( 71 个核苷酸的片断,编码 B2M 转录子)方面的效果。实验在同一块 PCR 板上进行,使用 ABI 7900 Fast 实时 PCR 仪, cDNA 的上样量为分别为 400 pg , 40 pg , 4 pg , 0.4 pg , 0.04 pg 和 0 pg 。以不结合 DNA 的 ROX 染料作为参照计算最终的 ΔRn 值,从而真实地?#20174;?#27599;种产品的荧光值变化。由于 Q 公司的 master mix 激活相对较慢,整块 PCR 板的激活条件都是 95 oC 下 5 ?#31181;印?PCR 循环为三步: 96°C 下 5 s ,之后 60°C 下 5 s ,接着 72°C 下 25 s 。左上方的小图显示的是放大以后基线附近的扩增情况,由于两种 基于 SYBR 的快速 master mix 产品扩增信号?#23545;?#24369;于 EvaGreen Master Mix ,放大以后能更好的观察扩增曲线。

    使用效果

    Fast EvaGreen Master Mix 产品已经使用各种类型的扩增模版进行过测试,包括:短片断( <100 bp ),长片断( >700bp ),?#32531;?AT 的片断,?#32531;?GC 的片断以及基因组起始区。实验结果显示, Fast EvaGreen Master Mix 扩增效率优异,结果优于其它供应商的基于 SYBR 的 master mix 产品。图 1 和图 2 分别比较了 Biotium 公司的 Fast EvaGreen Master Mix 产品和市场上其他两家主流公司( A 公司和 Q 公司)生产的基于 SYBR 的快速 qPCR master mix 产品在扩增人类基因组 DNA 和人类大脑 cDNA 方面的效果。结果显示, Fast EvaGreen Master Mix 的灵敏度?#23545;?#39640;于其他两款产品,检测线性范围也更宽。特别是在扩增较为困难的人类基因组 DNA 方面, Fast EvaGreen Master Mix 的优势显示的更为明显(图 1 )。使用 EvaGreen Master Mix 获得的 Ct ?#21040;?#23567;,线性检测范围达到了 5 个数量级,而使用 A 公司和 Q 公司的产品,特别是 A 公司的产品, Ct 值延后现象比较?#29616;兀?#32447;性范围变窄(对应的是图上两条曲线之间的距离不规则)。图 3 和图 4 显示,三种产品在融解曲线分析上的结果和上述 qPCR 的结果是一致的。 使用 Fast EvaGreen Master Mix 产品生成的融解曲线信号?#23545;?#24378;于其他两种基于 SYBR 的快速 qPCR master mix 产品。

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    图 3. 比较 Fast EvaGreen Master Mix 产品和来自 A 公司以及 Q 公司的产品在融解曲线分析方面的表现。 分别 使用三种 产品对 200 ng 人类基因组 DNA 扩增后的样品 测定融解曲线 。扩增的详细信息参见图 1 中的描述。 ? 图 4. 比较 Fast EvaGreen Master Mix 产品和来自 A 公司以及 Q 公司的产品在融解曲线分析方面的表现。 分别 使用三种 产品对 400 pg 人类大脑 cDNA 扩增的样品 测定融解曲线 。扩增的详细信息参见图 2 中的描述。

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    通用性

    除了在 qPCR 方面的应用, Fast EvaGreen Master Mix 也能被用于高分辨率融解曲线分析( HRM )以及基于核苷酸探针的 qPCR 应用。 HRM 是一种最新发展出来的 DNA 分析技术,可用于检测点突变。由于 HRM 分析简单且成本低,这种方法的应用越来越广泛。要进行精确的 HRM 分析,首要的条件就是染料的浓度应该高于或?#23545;?#39640;于 qPCR 所需最优的 SYBR Green I 或其他同类型 DNA 结合染料的浓度。

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    图 4. 使用包含 EvaGreen 染料和 NEP 标记的 AllGlo 探针(一种类似 TaqMan 的荧光探针)的 Fast EvaGreen Master Mix 分别扩增 B2M 基因片断和它的两个突变体(突变体 1 和突变体 2 )。突变体 1 在探针结合区域外有单一位点的点突变,突变体 2 的点突变则在探针结合区域中间。在每个反应中, EvaGreen 的信号(虚线)用绿色通道( FAM )纪录,同时探针的信号(实线)用红色通道( Cy5 )纪录。野生型(绿色)和突变体 1 (红色)能同时在 FAM 和 Cy5 通道收集到阳性信号。突变体 2 (蓝色)由于不能和探针结合,因此仅在 FAM 通道收集到阳性信号,而 Cy5 通道没有阳性信号。

    因此,这些染料都无法用于制备同时适合 qPCR 和 HRM 的 master mix 产品。尽管目前市场上有一些声称同时适合 qPCR 和 HRM 的 master mix 产品使用了 SYBR 或其他类似染料,但由于需要在染料浓度上兼顾两种应用,它们的效果都不尽如人意。由于 EvaGreen 使用了创新设计的 “ 按要求释放 ”DNA 结合机制,它对 PCR 的?#31181;?#20316;用很低,在 qPCR 实验中可以使用较高的浓度?#28304;?#21040;最大的荧光信号值。同时,这时候的染料浓度也能达到 HRM 分析所需的理想浓度,从而实现了一种 master mix 产品同时完美的适用于 qPCR 和 HRM 两种应用。

    此外, Fast EvaGreen Master Mix 的另一项?#26469;?#24212;用是在同一 qPCR 反应?#22411;?#26102;使用 EvaGreen 和一种或多种核苷酸探针(例如: TaqMan 剖探针或者 AlleLogic Biosciences 公司的 AllGlo 探针)。在这项应用中, EvaGreen 染料使用绿色通道检测总的 DNA 生成,而核苷酸探针可以在红色通道同时检测每个目标片断的扩增情况。更重要的是, PCR 之后还可以进行融解曲线分析,以确定有几种片断被成功扩增。

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    图 5. 对图 4 中的产物进行高分辨率融解曲线分析( HRM )。用归一化的荧光值对温度作图(左图),以及用荧光值的导数对温度作图(右图)。两张图上对于同一基因型都仅绘出了一条具有代表性的曲线。 HRM 成功地分析出了所有的三种基因型。

    Table A. 订货信息

    Cat#
    Product Name
    Unit Size Unit Price 促销价 品 牌
    31003
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix (200 rxn)
    2 x 1mL
    ¥1482
    ¥917 美国Biotium
    31003-2
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix (5,000 rxn)
    50 x 1mL
    ¥29400
    美国Biotium
    31003-1
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix (500 rxn)
    5 x 1mL
    ¥3234
    ¥2246 美国Biotium
    31003-T
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix (trial size, 100 rxn)
    1 x 1mL
    ¥706
    美国Biotium
    31015
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix -High Rox (200 rxn)
    2 x 1mL
    ¥1705
    美国Biotium
    31015-2
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix -High Rox (5,000 rxn)
    50 x 1mL
    ¥33810
    美国Biotium
    31015-1
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix -High Rox (500 rxn)
    5 x 1mL
    ¥3716
    美国Biotium
    31015-T
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix -High Rox (trial size, 100 rxn)
    1 x 1mL
    ¥811
    美国Biotium
    31014
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix -Low Rox (200 rxn)
    2 x 1mL
    ¥1705
    美国Biotium
    31014-2
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix -Low Rox (5,000 rxn)
    50 x 1mL
    ¥33810
    美国Biotium
    31014-1
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix -Low Rox (500 rxn)
    5 x 1mL
    ¥3716
    美国Biotium
    31014-T
    Fast EvaGreen? qPCR Master Mix -Low Rox (trial size, 100 rxn)
    1 x 1mL
    ¥811
    美国Biotium





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