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    现在位置首页>实验试剂制品>克隆与表达>转染试剂> 高效转染各种真核细胞1.5mL

    商品编号:54183
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    高效转染各种真核细胞1.5mL

    价    格:2716.00

    产    地:美国更新时间:2016/12/19 11:00:40

    品    牌:Biomiga型    号:GT1211-03

    状    态:正常点击量:1042

    15068328216
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    上海妙骏生物科技有限公司

    联 系 人:言国英

    电     话:021-54461558

    传     真:021-54461657

    等     级: (第 10年)

    性     质:生产型,

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    可用于450次6-孔板或3.5mm培养皿的细胞转染。

    产品说明

    GeneTran是一种新型的脂质体和多聚物混合的转染试剂,可用于各种真核细胞系的质粒转染,如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干细胞和纤维原细胞、间质干细胞、NCCIT、果蝇细胞。同时原代细胞也能转染,如人肿瘤细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞、大鼠和小鼠皮质神经细胞、肝细胞等。对于悬浮细胞也有较高的转染效率和?#31995;?#30340;毒性,如HEK 293、小鼠淋巴细胞、昆虫细胞(sf9, sf21, High-Five)。有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。
    ?
    主要特点
    ?
    n? 高效转染各种贴壁细胞。
    n? 对胚胎干细胞和原代细胞有较高的转染效率。
    n? 对悬浮细胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆虫细胞也有很高的转染效率。
    n? 在同类产品中具有更高的转染效率和更低的毒性。
    n? 有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。
    n? 可用于单个质粒或多个质粒共转。
    n? 转染24-72小时后,有高的蛋白表达量。
    n? 性价比高
    n? 操作简便
    ?
    保存条件
    ?
    GeneTran 可在4℃(切勿放-20℃)至少保存12个?#38534;?#20351;用之前请先将试剂瞬时离心。
    ?
    质粒转染步骤
    ?
    以下步骤是用于35mm培养皿或6孔培养板转染真核细胞的。若用于其他规格培养皿的转染,请参考表1的用量。所有的数据和体积都是每孔的用量。对于绝大多数的细胞系和原代细胞,质粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。转染HEK293细胞可?#35805;?:1混合。有时优化条件也是必须的(参见质粒DNA转染条件的优化,第5页)。

    A. 转染贴壁细胞(35 mm培养皿或6孔培养板)
    转染前一天铺板使转染时细胞达到60-70%的汇合度。
    1.?对于每一个转染样本,按如下比例配制转染混合?#28023;?/strong>
    2.5 ????μg??? 质粒DNA
    5??????? μL??? GeneTran
    x? ????? μL??? 无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)
    ??????????? 总体积100 μL
    * 绝对不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
    2.?用枪头吹打混匀,放置于室温20-40min。
    3.?将混合液加入细胞培养皿中,晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
    注:血清浓度对于转染效果无影响,经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
    4.?在转染后的18-48小时之间,对细胞进行换液。转染18-48小时之后可 检测基因表达。如果检测到蛋白表达,请在转染后4-5天收集培养液。
    5.?如果要得到稳定细胞株,请在转染24小时后按1:10传代培养。
    ?
    B. 转染悬浮细胞(35 mm培养皿或6孔培养板)
    转染时保证细胞超过90%的密度
    1.?对于每一个转染样本,按如下比例配制转染混合?#28023;?/strong>
    2.5 ????μg??? 质粒DNA
    5??????? μL??? GeneTran
    X??? ??? μL??? 无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)
    ??????????? 总体积100 μL
    *? 绝对不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
    2.?用枪头吹打混匀,放置于室温20-40?#31181;印?/strong>
    3.?将混合液加入细胞培养皿中,晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
    ??? 注:血清浓度对于转染效果无影响,经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
    4.?在转染后的18-48小时之间,对细胞进行换液。转染18-48小时之后可检测基因表达。如果有蛋白表达,请在转染后4-5天收集培养液。
    5.?如果要得到稳定细胞株,请在转染24小时后按1:10传代培养。

    表1各种细胞培养板转染推荐用量
    ?
    培养皿/板
    表面积(cm2
    培养?#28023;╩L)
    混合?#28023;é蘈)
    质粒(μg)
    GeneTran
    10cm
    56
    10
    500
    10
    20-30 μL
    60mm
    21
    3
    150
    3
    6-9 μL
    35mm
    8
    2
    100
    2.5
    5-7.5 μL
    6孔
    9.5
    2
    100
    2.5
    5-7.5 μL
    12孔
    3.8
    1
    50
    1
    2-3 μL
    24孔
    1.9
    0.5
    25
    0.5
    1-1.5 μL
    48孔
    0.95
    0.25
    12.5
    0.25
    0.5-0.75 μL
    96孔
    0.32
    0.1
    5
    0.1
    0.2-0.3 μL

    质粒转染条件优化
    ?
    n? 前面介绍的转染步骤是针对?#35805;?#27604;较好转的细胞。
    n? 对于C2C12肌肉细胞系,FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的转染效率不到10%,而GeneTran按照下面的体系转染效率可达70%:
    6 ???????? μg??? 质粒DNA
    12-18? μL??? ?GeneTran
    X??????????μL??? 无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)
    ????????? ??总体积100 μL
    ?
    n? 对于其他细胞系,可参?#23478;?#19979;方法优化条件:
    A. 在35mm培养板中将质粒量增加到3μg,4μg和6μg。
    B. 在35mm培养板中将GeneTran增加到15μL。
    C. 如果转染效?#24335;?#39640;,但死细胞较多,?#23665;?#20302;质粒量到1μg或更低。?#37096;?#20197;减少孵育时间到5-24小时。
    D. 可按下表优化条件:
    问题
    DNA
    GeneTran
    细胞毒性
    降到1-2 μg
    降到2-3 μL
    转染效?#23454;?/strong>
    对于难转的细胞增加到4μg
    增加到>1:4
    对于特别难转的细胞增加到6μg
    增加到>1:4

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