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    Hieff NGS? Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI? MGI? 13341ES16
    • Hieff NGS? Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI? MGI? 13341ES16

    Hieff NGS? Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI? MGI? 13341ES16

    产品报价:1853元

    更新时间:2019/8/23 8:47:52

    地:上海

    牌:翊圣生物

    号: 13341ES16

    厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

    公司名称: 上海翊圣生物科技有限公司

    产品关键词: 建库模块与单酶原料   Hieff NGS? Fast-Pace DNA Cycli   Hieff NGS? Fast-Pace DNA Cycli  

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    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS? Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI?

    MGI?测序平台 Fast-Pace DNA 环化试剂盒

    13341ES16

    16T

    1853.00

    13341ES96

    96 T

    9253.00

    产品描述

    Hieff NGS? Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI?是针对 MGI?高通量测序平台专门开发设计的单链环化试剂盒。本产品采?#37238;?#36136;量的酶和经优化后的 buffer 组成,显著提高反应效率, 使整个环化消化流程在 30 min 内完成。本试剂盒适用于所有连接华大标准接头的文库扩增产物, 除建库试剂本身的限制外,本环化试剂盒不限 MGI?测序平台。

    产品组分

    组分编号与名称

    13341ES16

    13341ES96

    13341-A

    QQ?#35745;?0190812165104.png   

    Splint Oligo

    112 μL

    672 μL

    13341-B

    QQ?#35745;?0190812165130.png   

    Splint Buffer

    240 μL

    2×720 μL

    13341-C

    QQ?#35745;?0190812165151.png   

    Ligase

    80 μL

    480 μL

    13341-D

    QQ?#35745;?0190812165151.png 

    Digestion Buffer

    128 μL

    768 μL

    13341-E

    QQ?#35745;?0190812165130.png 

    Digestion Enzyme

    32 μL

    192 μL

    运输与保存方法

    冰袋运输。

    所有组分-20°C保存,有效期1年。

    注意事项

    一、关于操作

    1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后置于冰上待用。

    3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡,剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

    4. 为避免样品交叉污染,推荐使用带滤芯的枪头,吸取不同样品时请更换枪头。

    5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

    6. 定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次?#20154;?#38048;或10%漂白剂进行擦拭清理),?#21592;?#35777;实验环境的洁?#27426;取?/span>

    二、样本要求及处理

    2.1样本量要求

    1. 本试剂盒推荐的Input DNA量为1 pmol;若PCR产物不足,最低?#23665;?#33267;0.5 pmol投入量。

    2. 若有特殊的环化投入量需求,则按照文库制备试剂盒的要求投入所需的 Input DNA 量。

    3. 不同片段大小 DNA 1 pmol 分子对应不同的质量,可根据公式 1 计算或参考表 1 选择所需的 Input DNA 量:

     

    公式 1 PCR 产物摩尔数与质量间的换算

    1 pmol PCR 产物对应的质量 (ng)=DNA 主片段大小 (bp)×0.66

     

    1  不同片段大小PCR产物1pmol对应产量

    插入片段大小(bp

    PCR产物主片段大小(bp

    1 pmol对应产量(ng

    150

    230

    152

    200

    280

    185

    250

    330

    218

    300

    380

    251

    2.2 样本混样要求

    1.  Input DNA 可以是单个样本,?#37096;?#20197;是多个带有不同 Barcodes 的样本的混合物。

    2. 对样本进?#35874;?#21512;时需满足 Barcodes 混合的要求,可参考表Adapters 试剂盒说明书选择合适的 Barcodes 进?#35874;?#21512;。

    3. 混合的样本总量推荐为 1 pmol,若每个样本所需数据量相同,则等量混合,每个样本所需的质量按照公式 2 进行计算:

    公式 2 混合样本中单个样本所需质量的计算

    单个样本所需的质量(ng)=1 pmol Input DNA 对应的质量(ng /混合的样本个数 N

    4. 单个样本或混合后样本用于环化时,体积应为 43 μL,若不足则用 ddH2O 补充至 43 μL

    、关于磁珠纯化(Bead-based Clean Up

    1. 磁珠使用前应先平衡至室温,否则会导致纯化得率下降。

    2. 磁珠?#30475;问?#29992;前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。

    3. 磁珠漂?#35789;?#29992;的80%乙醇应现用现配,否则将影响回收效?#30465;?/span>

    4. 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容?#33258;?#25104;无水乙醇残留影响后续反应;过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得?#30465;?#36890;常情况下,室温干燥5 min

    5. 单链环产物纯化保存,可使用TE Buffer洗脱,产物可于-20°C可保存1个月。

    四、关于文库?#22987;歟?/span>Library Quality Analysis

    1.单链环产物纯化后推荐使用 Qubit? ssDNA Assay Kit 单链 DNA 荧光染料试剂对纯化后产物进行定量。  
    2. 针对华大智造高通量测序平台, 单链环产物纯化后产量应 80 fmol (足够2次上机测序)
    3. 可根据公式 3 计算或参考表 2 

    公式 3 单链环摩尔数与质量间的换算
    80 fmol 单链环对应的质量 (ng)=0.08×DNA 主片段大小 (bp)×0.33

    2  不同PCR产物片段大小对应80fmol单链环产量

    插入片段大小(bp

    PCR产物主片段大小(bp

    80 fmol对应产量(ng

    150

    230

    6.07

    200

    280

    7.39

    250

    330

    8.71

    300

    380

    10.03

    使用方法

    一、?#21592;?#26448;料

    1. 纯化磁珠:Cat#12601Hieff NGS? DNA Selection BeadsCat#A63880AMPure XP Beads或其他等效产品。

    2. 文库质控:Cat # Q10212, Thermo fisher Qubit? ssDNA Assay Kit

    3. 其他材料:无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer10 mM Tris-HClpH 8.0-8.5+0.1 mM EDTA)、低吸附EP管、PCR管、磁力架、PCR仪?#21462;?/span>


    二、操作流程

    QQ?#35745;?0190812091911.png

    三、操作步骤

    3.1 变性

    1. 根据文库长度, 取 1 pmol 0.2 ml PCR 管中。

    2. 将表 3 中试剂解冻后,颠倒混匀并置于冰上备用。

    3. 冰上配制表3反应体系。

    3 DNA变性体系

    名称

    体积(μL

    单个或混合好的双链文库

    43

    Splint Oligo

    7

    Total

    50

    4. 混匀后,在 PCR 仪上进行 98℃变性 3 min,之后立即置于冰上,冰浴 2 min 后瞬时离心。

    3.2 单链环化

    1. 将表 4 中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

    2. 冰上配制表4反应体系。

    4单链环化体系

    名称

    体积(μL

    上一步反应物

    50

    Splint Buffer

    15

    Ligase

    5

    Total

    70

    3.使用移液器轻轻吹打或?#36864;?/span>振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底

     

    4. PCR管置于PCR仪上,按照表5所示摄?#21697;?#24212;程序,进行单链环化反应。

    5单链环化反应程序

    温度

    时间

    热盖105°C

    OFF

    37°C

    15min

    4°C

    Hold

     

    3.3 酶切消化

    1. 将表 6 中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

    2. 冰上配制表6所示反应体系。

    6 酶切消化体系

    名称

    体积(μL

    上一步反应物

    70

    Digestion Buffer

    8

    Digestion Enzyme

    2

    Total

    80

    3. 使用移液器轻轻吹打或?#36864;?/span>振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底

    4. PCR管置于PCR仪上,按照表7的条件进行反应:

    7  酶切消化反应程序

    温度

    时间

    热盖105°C

    OFF

    37°C

    10 min

    4°C

    Hold

    5. 反应结束后,瞬时离?#27169;?#31435;即进行纯化

    3.4 消化产物纯化

    该步骤使用磁珠对3.3步骤的产物进行纯化。

    1. 准备工作:将Hieff NGS? DNA Selection Beads Beckman AMPure XP Beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

    2. ?#34892;?#25391;荡或充分颠倒磁珠?#21592;?#35777;充分混匀。

    3. 吸取120 μL Hieff NGS? DNA Selection Beads消化产物中,室温孵育10min

    4. PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约2 min),小心移除上清。

    5. 保持PCR管始终置于磁力架中,加入500μL新鲜配制的80%乙?#35745;创?#29664;,室温孵育30 sec后,小心移除上清。

    6. 重复步骤5,总计漂洗两次。

    7. 保持PCR管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟?#36873;?/span>

    8. PCR管从磁力架中取出,加入22 μL TE Buffer,?#34892;?#25391;荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置10 min

    9. 短暂离?#27169;?#23558; PCR 管始终置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约 2min),将上清小心移?#21015;?PCR 管中, -20℃保存,待制备 DNB

    3.4 消化产物质控

    使用Qubit? ssDNA Assay Kit荧光试剂对酶切消化产物进行定量,具体请参见注意事项四。

     

     

     

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