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    Hieff NGS? Ultima DNA Library Prep Kit for MGI? 13310ES16
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    • Hieff NGS? Ultima DNA Library Prep Kit for MGI? 13310ES16

    Hieff NGS? Ultima DNA Library Prep Kit for MGI? 13310ES16

    产品报价:4763元

    更新时间:2019/8/12 16:58:40

    地:上海

    牌:翊圣生物

    号: 13310ES16

    厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

    公司名称: 上海翊圣生物科技有限公司

    产品关键词: DNA-Seq   Fragmented DNA   Hieff NGS? Ultima DNA Library  

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    产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS? Ultima DNA Library Prep Kit for MGI?

    13310ES16

    16T

    4763.00

    13310ES96

    96 T

    24563.00

    产品描述

    Hieff NGS? Ultima DNA Library Prep Kit for MGI?是针对MGI?高通量测序平台定向优化而成的新一代建库试剂盒。作为全新的升级版本,本产品采用高质量的酶学组成,简化的操作流程,可显著提微量样本文库转化率与扩增效率,特别适用于cfDNA样本助力获得优异的测序数据

     适用500 pg-50 ng DNA样本

     高效的文库转化率与扩增效率

     多样本验证可获得优异的文库与测序数据

     严格的批次性能与稳定性质控

    产品组分

    组分编号与名称

    13310ES16

    13310ES96

    13310-A

    QQ图片20190812165104.png 

    Endprep Mix

    160 μL

    960 μL

    13310-B

    QQ图片20190812165130.png 

    Ligation Enhancer

    480 μL

    4×720 μL

    13310-C

    QQ图片20190812165130.png 

    Fast T4 DNA Ligase

    80 μL

    480 μL

    13310-D

    QQ图片20190812165151.png 

    2×Ultima Amplification Mix for MGI?

    400 μL

    4×600 μL

    13310-E

    QQ图片20190812165151.png 

    Primer Mix for MGI?

    80 μL

    480 μL

    运输与保存方法

    冰袋运输。

    所有组分-20°C保存,有效期1年。

    注意事项

    一、关于操作

    1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后置于冰上待用。

    3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡,剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

    4. 为避免样品交叉污染,推荐使用带滤芯的枪头,吸取不同样品时请更换枪头。

    5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

    6. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染,进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离;使用专用的移液器等设备;并定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次?#20154;?#38048;或10%漂白剂进行擦拭清理),?#21592;?#35777;实验环境的洁?#27426;取?/span>

     

     

    使用方法

    一、?#21592;?#26448;料

    1. 纯化磁珠:Cat#12601Hieff NGS? DNA Selection BeadsCat#A63880AMPure XP Beads或其他等效产品。

    2. DNA质控:Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer或其他等效产品。

    3. DNA Adapter详情请咨询华大智造或本公司。

    4. 其他材料:无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer10 mM Tris-HClpH 8.0-8.5+0.1 mM EDTA)、低吸附EP管、PCR管、磁力架、PCR仪?#21462;?/span>

    二、操作流程



    QQ图片20190812165735.png


    三、操作步骤

    3.1 末端修复/dA尾添加(End Preparation/dA-Taling

    该步骤将Input DNA末端补平,并进行5’端磷酸化和3’端加dA尾。

    1. 将表1中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

    2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系。

    1  末端修复/dA尾添加PCR反应体系

    名称

    体积(μL

    Fragmented DNA

    x

    Endprep Mix

    10

    ddH2O

    Up to 60 μL

    3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

    4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表2所示反应程序,进?#24515;?#31471;修复/dA尾添加反应。

     

     

     

     

     

    2  末端修复/dA尾添加PCR反应程序

    温度

    时间

    热盖105°C

    On

    30°C

    20 min

    72°C

    20 min

    4°C

    Hold

    3.2 接头连接(Adapter Ligation

    该步骤将3.1步骤的产物末端,连接特定的MGI?接头。

    1. 应用于cfDNA建库,接头加入体积固定

    2. 将表3中各试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用。

    3. 3.1步骤PCR管中配制表3所示反应体系。

    3  Adapter Ligation PCR体系

    名称

    体积(μL

    dA-tailed DNA3.1步骤产物)

    60

    Ligation Enhancer

    30*

    Fast T4 DNA Ligase

    5

    DNA Adapter for MGI

    5

    *Ligation Enhancer略有粘稠,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

    4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底。

    5. PCR管置于PCR仪中,设置表4所示反应程序,进行接头连接反应:

    4  Adapter Ligation PCR反应程序

    温度

    时间

    热盖105°C

    Off

    20°C

    15 min

    4°C

    Hold

    Input DNA量?#31995;停?#23454;验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。

    3.3 连接产物磁珠纯化(Post Ligation Clean Up

    该步骤使用磁珠对3.2步骤的产物进行纯化。纯化可除去未连接的AdapterAdapter Dimer等无效产物。

    1. 准备工作:将Hieff NGS? DNA Selection Beads磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

    2. ?#34892;?#25391;荡或充分颠倒磁珠?#21592;?#35777;充分混匀。

    3. 吸取80 μL Hieff NGS? DNA Selection Beads0.8×Beads:DNA=0.8:1)至Adapter Ligation产物中,室温孵育5 min

    4. PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。

    5. 保持PCR管始终置于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙?#35745;创?#29664;,室温孵育30 sec后,小心移除上清。

    6. 重复步骤5,总计漂洗两次。

    7. 保持PCR管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂(不超过5 min)。

    8. PCR管从磁力架中取出,直接加入22 μL ddH2O,?#34892;?#25391;荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置5 min。【注:如纯化产物如需保存,可使用TE Buffer洗脱】。将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约5 min),小心移取20 μL上清至新PCR管中,切勿触碰磁珠。

    3.4 文库扩增(Library Amplification

    该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集。

    1. 将表5中试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用

    2. 于无菌PCR管中配制表5所示反应体系。

     

     

     

    5  PCR扩增反应体系

    名称

    体积(μL

    2×Ultima Amplification Mix for MGI?

    25

    Primer Mix for MGI?

    5

    Adapter Ligated DNA3.3步骤产物)

    20

    3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底。

    4. PCR管置于PCR仪中,设置表6所示反应程序,进行PCR扩增

    6  PCR扩增反应程序

    温度

    时间

    循环数

    98°C

    1 min

    1

    98°C

    10 sec

    按照客户需求进行

    60°C

    30 sec

    72°C

    30 sec

    72°C

    5 min

    1

    4°C

    Hold

    -

    3.5 扩增产物磁珠纯化或分选(Post Amplification Clean Up/Size Selection

    3.3步骤中纯化操作步骤。使用Hieff NGS? DNA Selection Beads0.9×Beads : DNA=0.9:1)纯化文库扩增产物。

    3.6 文库质量控制

    通常情况下,构建好的文库可通过浓度检测和长度分?#25216;?#27979;来进行质?#31185;?#20215;,具体请参见注意事项六。

    3.7 文库环化

    使用Hieff NGS? Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI?Cat#13341)或其他等效产品进行文库单链环化反应。

    3.8 参考实例

    使用Hieff NGS? Ultima DNA Library Prep Kit for MGI? 50 ng E.coli gDNA超声样本建库,结果使用Agilent Bioanalyzer 2100进行检测。

     

    2  Ultima DNA建库试剂盒PCR纯化产物Agilent 2100 检测结果input样本主带大小300 bp

     

     

     

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    12600ES08/56

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    12603ES24/96

    24/96 T

    616/2266

    建库接头

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS? Complete Adapter Kit for MGI, Set 1

    13360ES04/16/96

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    1153/3653/15653

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    13361ES04/16/96

    16×4/×16/×100 T

    1153/3653/15653

    Hieff NGS? Complete Adapter Kit for MGI, Set 3

    13362ES04/16/96

    16×4/×16/×100 T

    1153/3653/15653

    Hieff NGS? Complete Adapter Kit for MGI, Set 4

    13363ES04/16/96

    16×4/×16/×100 T

    1153/3653/15653

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    12608ES24/96

    24/96 T

    2066/6166

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    12250ES24/96

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    12307ES09

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    100/500 T

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    多重PCR定制咨询

     

    HB190807


    上海翊圣生物科技有限公司

    | 第12

    手机:13916792673

    联系人:翊圣生物

    电话:400-6111-883

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    (联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)


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